乳品類食物DNA分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

乳品類食物DNA分離試劑是一種旨在直接從各種乳品類食物樣品（牛奶、奶粉、奶酪等）中提取體細胞或外源微生物DNA，有效地去除各種混雜物（蛋白、色素、脂類等）和化學抑制劑（PCR多聚酶抑制劑等）的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其應用于后續(xù)即時PCR、RLPF分析、測序、雜交、乳品鑒定、衛(wèi)生鑒定、司法鑒定等。產品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡單，純度產量高，重復性好。

技術背景

乳品類食物中，包括牛奶、奶粉、奶酪等，含有奶源體細胞和乳腺炎病原體、以及可能污染的微生物，通過化學緩沖、物理處理、特殊裂解、大劑量特級酶、特別萃取等技術方法，既有效地去除各種蛋白、色素、脂類、多糖，以及干擾酶切反應和抑制PCR擴增等因子，又能最大程度分離出核酸成分。 

產品內容

緩沖液（Reagent A）       5毫升

分離液（Reagent B）   40毫升

裂解液（Reagent C） 10毫升

萃取液（Reagent D）         10毫升

濃縮液（Reagent E）  3毫升

助沉液（Reagent F） 20微升

沉淀液（Reagent G）         5毫升

清理液（Reagent H）      10毫升

保存液（Reagent I）    1毫升

產品說明書     1份

保存方式

保存裂解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

無離子水：用于溶解樣品

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品分離操作

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

實驗步驟

實驗開始前，將裂解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）從－20℃冰箱里取出，放入冰槽里融化。然后進行下列操作：

• 樣品預處理

選擇一：液態(tài)奶

• 移取5毫升液態(tài)奶到15毫升錐形離心管
• 加入500微升緩沖液（Reagent A）
• 強力渦旋震蕩5分鐘
• 加入4毫升分離液（Reagent B）
• 強力渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為8000g
• 小心抽去上清液

選擇二：奶酪

• 秤取1克奶酪
• 加入5毫升40預熱的用戶自備的無離子水
• 加入500微升緩沖液（Reagent A）
• 放進勻漿機勻漿2分鐘或強力渦旋震蕩5分鐘
• 轉移到15毫升錐形離心管 
• 加入4毫升分離液（Reagent B）
• 強力渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為8000g
• 小心抽去上清液

選擇三：奶粉

• 秤取1克奶粉（包括脫脂奶粉）
• 加入5毫升40預熱的用戶自備的無離子水
• 加入500微升緩沖液（Reagent A）
• 放進勻漿機勻漿2分鐘強力渦旋震蕩5分鐘
• 轉移到15毫升錐形離心管 
• 加入4毫升分離液（Reagent B）
• 強力渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為8000g
• 小心抽去上清液

• DNA萃取

• 加入1毫升裂解液（Reagent C）（注意：使用前，先搖勻裂解液（Reagent C））
• 強力渦旋震蕩15秒，充分混勻
• 室溫下靜置15分鐘，期間渦旋震蕩15秒三次
• 放進臺式離心機離心30分鐘，速度為3000g
• 小心移出1毫升上清液到新的2毫升離心管
• 加入1毫升萃取液（Reagent D） 
• 渦旋震蕩30秒
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）
• 加入250微升濃縮液（Reagent E）
• 加入2微升助沉液（Reagent F）
• 加入500微升沉淀液（Reagent G）
• 上下翻轉10至15次，混勻
• 靜置5分鐘
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent H）
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 加入25微升保存液（Reagent I），溶解
• 移出適量DNA溶液進行后續(xù)PCR反應或保存在－20℃冰箱里

注意事項

• 本產品為10次操作
• 操作時須戴手套
• 如果用戶需要從不同重量的乳品材料中提取，可以按比例相應增加或減少試劑用量即可
• 建議至少使用1至3克樣品為佳
• 本公司提供各種乳品材料DNA萃取試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定純度產量高