細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑盒產品說明書

（中文版）

主要用途

細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術，分析細胞樣品中晚期脂褐素沉積現象，從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良SCHMORL方法、成功實驗證明的。主要適用于動物細胞的的晚期脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質，成為細胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期脂褐素作為較強還原性物質，在鐵離子的存在下，使鐵氰化物（ferricyanide）轉化為亞鐵氰化物（ferrocyanide），產生不可溶性普魯士藍（Prussian blue）產物，顯示藍色。

產品內容

清理液（Reagent A）       150毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

酸性液（Reagent D）   10毫升

產品說明書       1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent C）避免光照；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學顯微鏡：用于觀察染色后的細胞

實驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

• 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升染色液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent C）
• 小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）的小型染色缸里 
• 室溫下孵育2分鐘
• 取出載玻片片，小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升酸性液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的酸性液（Reagent D）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• （選擇步驟）復染（建議使用核固紅復染試劑盒——40011）
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：脂褐素陽性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

操作二：24孔細胞培養板染色

• 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面
• 小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升固著液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去每孔里的固著液（Reagent B）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心抽去染色液（Reagent C）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13至15二次
• 小心加上400微升酸性液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去酸性液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• （選擇步驟）復染（建議使用核固紅復染試劑盒——40011）
• 小心加入200微升清理液（Reagent A）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：脂褐素陽性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

注意事項

• 本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
• 本產品還可以染色其它還原性物質，包括黑色素（melanin）、肝膽汁（liver bile）、腸嗜鉻細胞（enterochromaffin）等
• 操作時，須戴手套
• 使用時，避免污染母液
• 染色液（Reagent C）避免光照
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定著色清晰