通用包涵體蛋白溶解試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

通用包涵體蛋白溶解試劑是一種旨在使用化學方法快速充分裂解細菌細胞，萃取包涵體，通過常用陰離子去垢劑N-十二烷基肌氨酸鈉（Syrkosyl），使不溶性蛋白聚集體溶化復原成可溶性蛋白質的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌內重組蛋白（融合蛋白）、尤其是不溶性蛋白的可溶性復原處理。可后續用于特定蛋白純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質譜分析等等。產品即到即用，性能穩定，參數優化，操作便捷，溶化效果理想。

技術背景

細菌作為宿主細胞廣泛用于重組蛋白的表達。在高度表達蛋白的純化過程中，80％的重組蛋白形成聚集體，而不可溶，變成包涵體（inclusion body）。包涵體內的蛋白折疊異常，但是表達蛋白豐富，容易分離純化，不易被內源性蛋白酶水解。通過特殊化學處理，包括變性劑、還原劑、鰲和劑等，能使不溶性狀態恢復為可溶性狀態，便于后續的各種生物學分析。

產品內容

清理液（Reagent A） 50毫升

裂解液（Reagent B）     250微升

溶解液（Reagent C）       1毫升

強化液（Reagent D）       4毫升

保存液（Reagent E）  5毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）和溶解液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

50毫升錐形離心管：用于細菌收集的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

2.2毫升離心管：用于樣品操作的容器

臺式離心機：用于細菌沉淀收集

4℃微型臺式離心機：用于細菌清洗沉淀和收集蛋白

200瓦超聲儀：用于細菌細胞裂解

恒溫水�。河糜诜磻�孵育

平式搖蕩儀：用于反應孵育

實驗步驟

• 準備50毫升過夜培養的菌液（或OD600＝1.0）
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 轉移到2.2毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群 
• 加入25微升裂解液（Reagent B），混勻
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 加入100微升溶解液（Reagent C），混勻
• （選擇步驟）置于200瓦超聲儀下，50％功率，猝擊2次，10秒1次，間隙30秒（注意：樣品管置于冰槽里）
• 放進37℃恒溫水浴孵育2分鐘
• 室溫下，平放在平式搖蕩儀上孵育25分鐘，速度為50RPM
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）移取20微升進行蛋白定量（建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）
• （選擇步驟）移取40微升進行SDS－PAGE電泳 
• 加入2毫升清理液（Reagent A）
• 加入330微升強化液（Reagent D）
• 加入400微升保存液（Reagent E），混勻
• 分裝到1.5毫升離心管，即刻放進－70℃冰箱保存

注意事項

• 本產品為10次操作
• 本產品用于一般包涵體的溶解處理
• 操作時須戴手套
• 操作時，注意溫度要求
• 本產品處理后，50毫升菌液通�？梢垣@得20至90％（平均50％）可溶性蛋白或1至5毫克重組蛋白，但是不同菌種的蛋白可溶性程度和產量會有差異
• 如果放在－70℃冰箱里儲存備用，避免反復凍融
• 如果復性效果欠佳，建議進一步使用可溶性包涵體蛋白復性（化學稀釋）試劑盒－30044.4或包涵體蛋白復性（物理透析）試劑盒－30044.5
• 本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無蛋白酶污染