石蠟切片組織蛋白萃�。ɑ瘜W處理II）試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片組織蛋白萃�。ɑ瘜W處理II）試劑是一種旨在使用標準化的化學脫蠟方法，然后通過物理熱處理、醛類分子清除干預、酸性化學系統等抗原修復技術，從存檔中的石蠟包埋切片中最大程度地破壞醛類分子、萃取、融解和穩定組織細胞膜結合、細胞質和細胞核蛋白質的權威而經典的技術方法。其適用于固著在福爾馬林或非交聯固著劑的動物和人體組織樣本�？捎糜诤罄m蛋白電泳、西方雜交（western blot）、質譜分析等操作。產品即到即用，性能穩定，產量滿意。

 

技術背景

 

在細胞生物學和醫學研究中，蛋白組學技術的應用，可以構建細胞內和細胞器中地蛋白質結構和功能，幫助更好地理解復雜的生物學過程。其中大量的具有臨床醫學價值的組織樣品，通過福爾馬林或其它非交聯的固著劑固化后包埋在石蠟中長期保存歸檔。因此從中萃取蛋白成為研究的前提。組織制片固定時，使用醛類固定劑（例如福爾馬林等），會導致醛類分子與組織蛋白產生分子交聯，遮蔽了組織抗原。其原理是在組織蛋白的反應部位（胺、氨類基團、巰基、氫氧基團、芳香環等）形成了亞甲基橋（methylene bridges）。首先通過物理熱處理和酸性化學系統等抗原修復技術，破壞并清除醛類分子，恢復蛋白抗原性；其次進行萃取、融解和穩定蛋白質，回收率可達90％。

 

產品內容

 

脫蠟液（Reagent A）   100毫升

脫水液A（Reagent B）   100毫升

脫水液B（Reagent C）   100毫升

脫水液C（Reagent D） 100毫升

脫水液D（Reagent E）   100毫升

清理液（Reagent F） 100毫升

萃取液（Reagent G）      10毫升

中和液（Reagent H）   1毫升

產品說明書        1份

 

保存方式

 

保存在室溫下，試劑具有腐蝕性，注意操作安全，有效保證6月

 

用戶自備

 

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

渦旋震蕩儀：用于樣品混勻

微型臺式離心機：用于樣品操作

超聲儀：用于樣品裂解

恒溫水槽或干式恒溫儀：用于樣品反應孵育

 

實驗步驟

 

• 脫蠟處理

 

• 選擇10片大小為1 X 1厘米、厚為10微米的石蠟切片
• 按下表依次放進小型染色缸里室溫下孵育

染色缸	孵育時間
脫蠟液（Reagent A）	3分鐘
脫蠟液（Reagent A）	3分鐘
脫水液A（Reagent B）	3分鐘
脫水液B（Reagent C）	3分鐘
脫水液C（Reagent D）	3分鐘
脫水液D（Reagent E）	3分鐘
清理液（Reagent F）	5分鐘

二、蛋白萃取

1． （選擇步驟）進行蘇木素伊紅染色

2． （選擇步驟）用精細針尖刻下需刮下的組織樣品

3． 用刀片刮下組織樣品

4． 放進1.5毫升離心管

5． 加入500微升萃取液（Reagent G）

6． 渦旋震蕩15秒

7． （選擇步驟）置于200瓦超聲儀槍頭下，離心管在冰槽里

8． （選擇步驟）超聲功率為100％，猝擊10秒，2個循環

9． 放進100℃恒溫水槽或干式恒溫儀里孵育20分鐘（注意：避免樣品干枯）

10． 再放進60℃恒溫水槽或干式恒溫儀里孵育2小時

11． 放進4℃微型臺式離心機離心20分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

12． 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管

13． 加入10微升中和液（Reagent H）

14． 移取2微升進行蛋白定量（注意：建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）

15． 放進－80℃冰箱長期保存或進行后續電泳等操作

 

 

注意事項

 

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 本產品可用于50微米厚或50微克重的經固定處理的組織切片
• 用戶根據組織切片大小和多少，調整萃取液（Reagent G）的用量
• 本產品的蛋白萃取效果高于冰凍切片的組織蛋白萃取
• 本產品的組織蛋白萃取產量為100至150微克/毫克組織干重
• 本產品萃取的組織蛋白為10KD至120KD范圍，可獲得達1000種不同蛋白分子
• 本公司提供系列蛋白萃取試劑產品

 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定萃取產量高
• 本產品經鑒定保留完整抗原性
• 本產品經鑒定適宜于固著劑處理的石蠟切片