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植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑盒
英文名稱:QQ 2851717098總訪問:235
國產(chǎn)/進(jìn)口:國產(chǎn)半年訪問:21
產(chǎn)地/品牌:上海一基產(chǎn)品類別:其他實驗耗材
規(guī)       格:48T 96T 最后更新:2025-2-13
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植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)

主要用途

植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑是一種旨在通過特殊離液劑,增強(qiáng)融化效力,快速充分裂解植物組織,并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下,通過超速離心,分離和收集所有可溶性植物組織細(xì)胞膜蛋白質(zhì)(完整蛋白和跨膜蛋白以及膜相關(guān)蛋白等)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種新鮮或凍存植物組織,包括葉片(leaf)、谷粒(grain)、種子(seed)等樣品膜蛋白的制備。可直接用于后續(xù)蛋白電泳(SDS-PAGE)、西方雜交(Western blotting)、親和層析純化(affinity chromotagraphy)、免疫沉淀(immunoprecipitation)、蛋白質(zhì)相互作用分析(protein-protein interaction)、特異性表達(dá)識別(specific expression identification)和質(zhì)譜分析等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作便捷,收集效果好。

 

技術(shù)背景

 

通過特殊的離液劑(chaotropic reagent)和非離子性去垢劑,例如硫脲(thiourea)和Brij 58等,以及蛋白酶抑制混合劑的共同作用,既防止裂解后植物組織內(nèi)各種活性蛋白成分遭到活化的內(nèi)源性蛋白酶的破壞,充分保留組織細(xì)胞膜蛋白的免疫和生物學(xué)活性,又確保膜蛋白(完整蛋白integral protein和跨膜蛋白transmembrane protein)的高產(chǎn)萃取,并更大程度地可溶性,便于后續(xù)電泳和質(zhì)譜分析。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A)      60毫升

裂解液(Reagent B) 60毫升

活性液(Reagent C)     300微升

溶解液(Reagent D)      20毫升

產(chǎn)品說明書  1份

 

保存方式

 

保存清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,有效保證6月

 

用戶自備

 

液氮管:用于組織凍存處理

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

2毫升離心管:用于樣品操作的容器

DOUNCE勻漿器:用于裂解組織

(微型)臺式離心機(jī):用于樣品操作

 

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將試劑盒里的試劑從-20℃的冰箱里取出,室溫下凍融。然后進(jìn)行下列操作。

 

  • 準(zhǔn)備好植物組織,例如葉片、種子等,并秤重200毫克 
  • (選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
  • (選擇步驟)加入3毫升清理液(Reagent A清洗
  • (選擇步驟)抽去清理液
  • 移入到一個液氮凍存管
  • 即刻放進(jìn)液氮罐過夜
  • 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融
  • 放進(jìn)一個新的預(yù)冷的2毫升離心管
  • 加入1毫升解液(Reagent B注意:如果解液(Reagent B出現(xiàn)結(jié)晶析出,可以溫育后使用 
  • 加入5微升活性液(Reagent C
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒,充分混勻
  • 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
  • 在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約80下)
  • 將所有組織勻漿物移入2毫升離心管
  • 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1000g
  • 小心移出上清液到另一個新的預(yù)冷的2毫升離心管
  • 即刻放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心30分鐘,速度為16000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入1毫升解液(Reagent B注意:如果解液(Reagent B出現(xiàn)結(jié)晶析出,可以溫育后使用 
  • 加入5微升活性液(Reagent C
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒,充分混勻
  • 室溫下孵育5分鐘
  • 即刻放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心30分鐘,速度為16000g
  • 小心抽去上清液
  • 重復(fù)實驗步驟19至24一次
  • 加入1毫升溶解液(Reagent D(注意:如果解液(Reagent D出現(xiàn)結(jié)晶析出,可以溫育后使用)
  • 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒,充分混勻
  • 室溫下孵育15分鐘,期間每隔5分鐘渦旋震蕩5秒
  • 即刻放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心30分鐘,速度為16000g
  • 小心移取上清液到新的2毫升離心管
  • 放進(jìn)-70℃的冰箱里備用
  • 或放進(jìn)冰槽里,繼續(xù)后續(xù)操作

 

注意事項

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作
  • 操作時須戴手套
  • 建議一次操作的組織重量在10至250毫克
  • 建議使用新鮮或冰凍保護(hù)良好的植物組織
  • 如果組織含有高濃度的多糖和多酚,建議使用多糖/多酚植物組織蛋白制備預(yù)處理試劑盒-30089
  • 碾碎組織步驟:可以將液氮處理的組織放進(jìn)研缽研磨成粉
  • 如果放在-70℃冰箱里儲存?zhèn)溆茫苊夥磸?fù)凍融
  • 本公司提供系列植物組織蛋白制備試劑產(chǎn)品
      

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無蛋白酶污染
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