冰凍切片組織堿性磷酸酶活性染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI冰凍切片組織堿性磷酸酶活性染色試劑是一種旨在使用偶聯偶氮技術，在底物存在的情況下，分析組織樣本中堿性磷酸酶表達，而呈現亮紅色沉淀現象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于動物組織冰凍切片，同時也適合原生代或培養細胞的酶活性檢測。尤其可用于骨組織病理生理的研究和干細胞分化能力的鑒定。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術背景

堿性磷酸酶（ALKALINE PHOSPHATASE）在堿性環境下催化各種醇和酚的磷酸酯水解，存在于活躍運輸的膜上，如毛細血管及毛細血管的動脈部分的內皮，腎近曲小管壁邊緣和小腸上皮的紋狀緣，胎盤組織，未分化的干細胞等表達含量最為豐富。它與骨質的形成，維持細胞內磷酸酶的濃度，以及與經膜吸收和轉運過程有關。偶聯偶氮技術的基本原理為堿性磷酸酶水解底物（磷酸萘酯）釋放出萘酚，立即為重氮鹽所捕獲而成為不溶性有色的偶氮染料。實驗最初（1944）應用β-萘磷酸鹽作為底物，釋放出的萘酚與重氮α-萘胺偶聯，在酶的活動處形成有色沉淀。Burstone （1962）推薦使用替代萘酚，如萘酚AS-MX磷酸鹽。重氮鹽有很多種，但較適宜的有Fast blue RR，Fast red TR，Fast violet B，Fast blue VRT 和Fast black B。偶聯偶氮技術孵育時間短；穩定，靈敏；在正常組織中因無萘酚，故不需要對照；反應產物為偶氮染料難以溶解，不易彌散因而圖象清晰。

產品內容

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固著液（Reagent B）  毫升

YIJI反應液（Reagent C）  毫升

YIJI染色液（Reagent D）  管

產品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保證6月

用戶自備

甲基綠復染試劑盒（YIJI40010）或蘇木素復染試劑盒（YIJI80050）：用于常規染色后復染

小型染色缸：用于染色操作

光學顯微鏡：用于組織細胞染色后觀察分析

實驗步驟

樣本染色操作開始前，將試劑盒里的YIJI反應液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）置于室溫下預熱，并避光。然后移取xx毫升YIJI反應液（Reagent C）到YIJI染色液（Reagent D）管里，充分混勻后，標記為YIJI染色工作液，即刻使用。

• 樣本固著處理

• 取出待測的5至10微米厚的冰凍組織切片或細胞載玻片
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在切片或載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升－20℃預冷的YIJI固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 放進－20℃冰箱里，孵育5分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI固著液（Reagent B）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升YIJI染色工作液，鋪滿整個切片或載玻片樣品表面
• 室溫下暗室里孵育30至60分鐘；或直至可見紅色
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI染色工作液
• 室溫下，小心將切片或載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

• 樣本復染處理（選擇步驟）

• 樣本復染處理（甲基綠或蘇木素）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性細胞呈現粉紅或紅色，背景黃色，核為藍色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須帶手套
• YIJI染色工作液配制后，5分鐘內使用，不得久置
• YIJI染色工作液根據需要配制，每管可以染色10個樣本
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• YIJI固著液（Reagent B）須－20℃預冷
• 如果樣品中酶活性較低，細胞染色可以在37℃環境下進行
• 組織細胞染色注意不要過度
• 直接封片處理，不要使用有機溶劑（乙醇、二甲苯等），否則會使染色褪色
• 組織細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰