石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨直接染色試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理和毛地黃皂苷特異性與游離膽固醇反應(yīng)產(chǎn)生的不溶性產(chǎn)物，進(jìn)而使用鐵礬氧化和混合酸還原，形成短暫性藍(lán)綠色顯色，分析石蠟包埋組織切片中（最大程度保留的）游離膽固醇的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良舒爾茨經(jīng)典方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種人體和動(dòng)物組織石蠟切片中游離膽固醇的特異檢測(cè)。廣泛用于組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色敏感。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中，主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。毛地黃皂苷（digitonin）與游離膽固醇反應(yīng)產(chǎn)生不溶性復(fù)合物，通過脂溶性有機(jī)溶劑分離出游離膽固醇，然后通過舒爾茨（Schultz Reaction）染色技術(shù)，即鐵礬氧化和混合酸還原呈現(xiàn)針尖樣晶體狀藍(lán)藍(lán)色色素沉積。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的膽固醇成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以最大程度保護(hù)組織中的膽固醇成分是舒爾茨染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）          毫升

凈化液（Reagent B）   毫升

清理液（Reagent C）   毫升

沉淀液（Reagent D）   毫升

萃取液（Reagent E）   毫升

氧化液（Reagent F）   毫升

強(qiáng)化液（Reagent G）   毫升

穩(wěn)定液（Reagent H）   毫升

染色液（Reagent I）   毫升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存沉淀液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；氧化液（Reagent F），避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月 

用戶自備

培養(yǎng)箱：用于樣品反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、樣品脫蠟處理

• 取出待測(cè)的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上xx微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6一次
• 小心加上xx微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升沉淀液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育2小時(shí)（注意：避免干枯）
• 小心移去載玻片上的沉淀液（Reagent D）
• 小心加上xx微升萃取液（Reagent E）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下孵育1小時(shí)（注意：避免干枯）
• 小心移去載玻片上的萃取液（Reagent E）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent C）

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升氧化液（Reagent F），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 37℃濕潤(rùn)培養(yǎng)箱孵育4小時(shí)，避免光照和干化
• 小心移去載玻片上的氧化液（Reagent F）
• 小心加上xx微升強(qiáng)化液（Reagent G）
• 室溫下孵育20分鐘
• 小心移去載玻片上的強(qiáng)化液（Reagent G）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6二次
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升穩(wěn)定液（Reagent H）
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的穩(wěn)定液（Reagent H）
• 空氣中晾干
• 小心加上xx微升預(yù)冷的染色液（Reagent I），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 即刻放上蓋玻片
• 在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：游離膽固醇陽性呈現(xiàn)藍(lán)綠色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 試劑含有腐蝕性酸性物質(zhì)，注意操作安全
• 操作時(shí)，須戴手套
• 操作時(shí)，避免污染母液
• 建議使用玻璃染色缸，除說明書規(guī)定之外
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 染色后數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)，切片藍(lán)綠色會(huì)褪色甚至消失
• 樣品染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞膽固醇染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰