產品基本信息
 

產品名稱	Applied CellTM 人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒
貨    號	AC-1001028
規    格	基礎培養基90mL，添加劑10mL
保存條件	基礎培養基 2-8℃，添加劑-20--80℃保存； 混合后 2-8℃保存，3 周內使用完畢
使用范圍	人間充質干細胞誘導分化成軟骨
保質期	1年

 
產品簡介
人間充質干細胞成軟骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell®）自主研發的一款用于人類間充質干細胞分化成軟骨產品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質干細胞的誘導成軟骨分化。
產品特性

• 誘導分化程序簡單便捷。
• 誘導成軟骨細胞效率高。

 
產品內容
 

試劑	規格	數量	運輸
人間充質干細胞成軟骨分化基礎培養基	90mL	1 瓶	冰袋
人間充質干細胞成軟骨分化添加劑	10mL	1 支	干冰

 
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成軟骨檢測染液（Applied Cell®:AC-1001023）
細胞消化液（Applied Cell®:AC-1001024）
磷酸鹽緩沖液(1×) （Applied Cell®: Cat.AC-1001037）​

實驗準備
人間充質干細胞成軟骨分化培養基的配制：​
2.1. 在 2-8℃解凍人間充質干細胞成軟骨分化添加劑，輕晃搖勻；
2.2. 將添加劑加入到人間充質干細胞成軟骨分化基礎培養基中（添加劑 10mL 與 90mL 基礎培養基徹底混合）混勻，即為人類間充質干細胞成軟骨分化培養基。人間充質干細胞成軟骨分化培養基可在 2-8℃穩定儲存 2-3 周。
注意：人間充質干細胞成軟骨分化添加劑只能在 2-8℃解凍，待添加劑加入到培養基以后，請用
培養基潤洗添加劑試管 1-2 次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
實驗操作
3.1. 誘導成軟骨球
3.1.1. 誘導成軟骨分化實驗之前，用細胞消化液消化后計數；
3.1.2. 分配 0.5 mL 細胞懸液（2-3×105 個細胞）到 15mL 或 50mL 離心管中，300×g，離心 5min；
3.1.3. 吸掉上清，用 2-5mL 人間充質干細胞成軟骨分化培養基重懸沉淀。
3.1.4. 離心后擰松離心管蓋便于氣體交換，置于 37℃，5%CO2 培養箱中培養，第 2 天，細胞團應在離心管底部呈球形的團狀；
注意：離心后不需要吸掉上清液，且不要隨意晃動離心管。
3.1.5. 自接種時間開始計算，每天更換人間充質干細胞成軟骨分化培養基；
注意：每次換液時，輕輕的搖動離心管或輕彈離心管底部確保細胞球沒有粘附到管壁上。第 4-5
天即會看到非常明顯軟骨球。
3.1.6. 15-21 天，軟骨球停止生長，收獲軟骨球：吸掉人間充質干細胞成軟骨分化培養基，用
PBS 洗 1 次。
3.2. 成軟骨檢測染液染色
3.2.1. 清洗：軟骨球用 PBS 清洗 2 次；
3.2.2. 固定：加 2mL 細胞固定液，固定 30min，水洗 2 次；
3.2.3. 染色：成軟骨檢測染液（AC-1001023）染色 5min；
3.2.4. 洗滌：dH2O 洗去多余的染料，軟骨球呈深藍色。
切片染色：
3.2.5. 復水：將誘導分化的軟骨球切片浸泡在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5 min， 95% (vol/vol)
乙醇中 1×2min，70% (vol/vol)乙醇中 1×2 min；
3.2.6. 用流動的水沖洗 30s；
3.2.7. 成軟骨染料染色 5min；
3.2.8. 用 dH2O 洗去多余的染料；
3.2.9. 脫水：浸泡在 95% (vol/vol) 乙醇中 2×5min，在 100% (vol/vol) 乙醇中 2×5min;
3.2.10. 用二甲苯清洗 3×2 min；
3.2.11. 用中性樹膠封片，用顯微鏡觀察并拍照。