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主要用途
GenIII微孔板使用固定在微孔板上的94個不同的生化試驗(yàn)來對廣泛的革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌提供表型概況并進(jìn)行鑒定1,2。Biolog鑒定系統(tǒng)(Microlog-M,MicroStation,Omnilog®)中的軟件通過讀取GenIII微孔板上所表現(xiàn)出的表型圖譜來對細(xì)菌進(jìn)行鑒定。
概述
n BiologGenIII微孔板可以對微生物進(jìn)行94種表型測試,其中包括:71種碳源利用測試(圖1,1-9列)以及23種化學(xué)敏感性測試(圖1,10-12列)。微生物在測試板上所顯示出的“表型指紋”被用來在種的水平上鑒定該微生物。
n 所有必要的營養(yǎng)物質(zhì)以及生化試劑都被預(yù)先填充、干化在96個孔中。四唑類氧化還原染料通過色度的變化來指示微生物對碳源的利用程度以及對化學(xué)物質(zhì)的敏感程度。
試驗(yàn)的操作過程非常簡單,如圖2所示。在平板上按照常規(guī)方法劃線分離需要鑒定的微生物,然后將分離的到的純種用棉簽挑到接種液(IF)3中,配成指定細(xì)胞濃度的菌懸液。將菌懸液按每孔100µl的量加到GenIII板后孵育,以便微生物代謝后產(chǎn)生表型指紋圖譜。所有的孔在剛開始的時候都是無色的。當(dāng)孵育一段時間之后,那些能被細(xì)胞利用碳源的孔中的呼吸作用增強(qiáng)了。增強(qiáng)的呼吸作用導(dǎo)致四唑氧化還原染料被還原,變成紫色。而陰性孔則保持無色,就像沒有碳源的陰性對照孔(A1)一樣。同樣,還有一個陽性對照孔(A10)作為列10-12化學(xué)敏感性測試的參考。孵育后,通過顯紫色孔所產(chǎn)生的表型指紋同Biolog數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。如果找到匹配的,所分離出來的微生物在種的水平上得到鑒定。
A1 Negative Control 陰性對照 |
A2 Dextrin 糊精 |
A3 D-Maltose D-麥芽糖 |
A4 D-Trehalose D-海藻糖 |
A5 D-Cellobiose D-纖維二糖 |
A6 Gentiobiose 龍膽二糖 |
A7 Sucrose 蔗糖 |
A8 D-Turanose D-松二糖 |
A9 Stachyose 水蘇糖 |
A10 Positive Control 陽性對照 |
A11 pH 6 |
A12 pH 5 |
B1 D-Raffinose 蜜三糖,棉子糖 |
B2 α-D-Lactose α-D-乳糖 |
B3 D-Melibiose 蜜二糖 |
B4 β-Methyl-D-Glucoside β-甲酰-D-葡糖苷 |
B5 D-Salicin D-水楊苷 |
B6 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰-D-葡糖胺 |
B7 N-Acetyl-β-DMannosamine N-乙酰-β-D-甘露糖胺 |
B8 N-Acetyl-D-Galactosamine N-乙酰-D-半乳糖胺 |
B9 N-AcetylNeuraminic Acid N-乙酰神經(jīng)氨酸 |
B10 1% NaCl |
B11 4% NaCl |
B12 8% NaCl |
C1 α-D-Glucose α-D-葡糖 |
C2 D-Mannose D-甘露糖 |
C3 D-Fructose D-果糖 |
C4 D-Galactose D-半乳糖 |
C5 3-Methyl Glucose 3-甲酰葡糖 |
C6 D-Fucose D-果糖 |
C7 L-Fucose L-果糖 |
C8 L-Rhamnose L-鼠李糖 |
C9 Inosine 肌苷 |
C10 1% Sodium Lactate 乳酸鈉 |
C11 Fusidic Acid 梭鏈孢酸 |
C12 D-Serine D-絲氨酸 |
D1 D-Sorbitol D-山梨醇 |
D2 D-Mannitol D-甘露醇 |
D3 D-Arabitol D-阿拉伯醇 |
D4 myo-Inositol 肌醇 |
D5 Glycerol 甘油 |
D6 D-Glucose- 6-PO4 D-葡糖-6-磷酸 |
D7 D-Fructose-6-PO4 D-果糖-6-磷酸 |
D8 D-Aspartic Acid D-天冬氨酸 |
D9 D-Serine D-絲氨酸 |
D10 Troleandomycin 醋竹桃霉素 |
D11 Rifamycin SV 利福霉素SV |
D12 Minocycline 二甲胺四環(huán)素 |
E1 Gelatin 明膠 |
E2 Glycyl-L-Proline氨基乙酰-L-脯氨酸 |
E3 L-Alanine L-丙氨酸 |
E4 L-Arginine L-精氨酸 |
E5 L-Aspartic Acid L-天冬氨酸 |
E6 L-Glutamic Acid L-谷氨酸 |
E7 L-Histidine L-組胺 |
E8 L-Pyroglutamic Acid L-焦谷氨酸 |
E9 L-Serine L-絲氨酸 |
E10 Lincomycin 林肯霉素,潔霉素 |
E11 Guanidine HCl 鹽酸胍 |
E12 Niaproof 4 硫酸四癸鈉 |
F1 Pectin 果膠 |
F2 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 |
F3 L-Galactonic Acid Lactone L-半乳糖醛酸內(nèi)酯 |
F4 D-Gluconic Acid D-葡糖酸 |
F5 D-Glucuronic Acid D-葡糖醛酸 |
F6 Glucuronamid e 葡糖醛酰胺 |
F7 Mucic Acid 粘酸;粘液酸 |
F8 Quinic Acid 奎寧酸 |
F9 D-Saccharic Acid 糖質(zhì)酸 |
F10 Vancomycin 萬古霉素 |
F11 Tetrazolium Violet 四唑紫 |
F12 Tetrazolium Blue 四唑藍(lán) |
G1 p-Hydroxy- Phenylacetic Acid p-羥基-苯乙酸 |
G2 Methyl Pyruvate 丙酮酸甲酯 |
G3 D-Lactic Acid Methyl Ester D-乳酸甲酯 |
G4 L-Lactic Acid L-乳酸 |
G5 Citric Acid 檸檬酸 |
G6 α-Keto-Glutaric Acid α-酮-戊二酸 |
G7 D-Malic Acid D-蘋果酸 |
G8 L-Malic Acid L-蘋果酸 |
G9 Bromo-Succinic Acid 溴-丁二酸 |
G10 Nalidixic Acid 萘啶酮酸 |
G11 Lithium Chloride 氯化鋰 |
G12 Potassium Tellurite 亞碲酸鉀 |
H1 Tween 40 吐溫40 |
H2 γ-Amino-ButryricAcid γ-氨基-丁酸 |
H3 α-Hydroxy- Butyric Acid α-羥基-丁酸 |
H4 β-Hydroxy-D,LButyricAcid β-羥基-D,L丁酸 |
H5 α-Keto-Butyric Acid α-酮-丁酸 |
H6 Acetoacetic Acid 乙酰乙酸 |
H7 Propionic Acid 丙酸 |
H8 Acetic Acid 乙酸 |
H9 Formic Acid 甲酸 |
H10 Aztreonam 氨曲南 |
H11 Sodium Butyrate 丁酸鈉 |
H12 Sodium Bromate 溴酸鈉 |