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| 銷售商： 上海雅吉生物科技有限公司 | 查看該公司所有產(chǎn)品 >> |
- 介紹： 基 因 型F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124簡 要 說 明DH10Bac感受態(tài)主要用于生產(chǎn)重組桿狀病毒分子（Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)）。DH10Bac菌株中含有父本桿粒bMON14272、輔助質粒pMON7124：父本桿粒 bMON14272包含mini-F復制子,卡那抗性基因, attTn7位點和lacZα互補因子；輔助質粒pMON7124含有tnsABCD區(qū)（tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid），具有四環(huán)素抗性，在細胞擴增過程中丟失，但可提高供體質粒pFastBac轉化后的基因轉座效率。mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10Bac菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac）。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。φ80dlacZ∆M15的存在使DH10Bac可用于藍白斑篩選，High5TM系列DH10Bac感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/μg。操 作 說 明1.DH10Bac感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目 的DNA（質粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)液（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇4小時。4.復蘇完成后，用SOC稀釋轉化液到（10-1，10-2），每個稀釋用吸取100ul鋪一個LB平板（共涂3個平板），平板包含50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，10ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG。5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱48h。陽性驗證： 1.挑10個白色的克隆，重新劃線在LB平板（50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，10ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG）。37度過夜培養(yǎng)。2.挑選白色的克隆，轉接到含有50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline的LB培養(yǎng)液中，過夜培養(yǎng)。3.使用試劑盒抽提重組質粒DNA（＞100kb）。使用PCR法分析重組質粒是否正確重組。注 意 事 項1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。2.混入質粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。4. 涂板時務必涂干，平板表面不留任何水漬。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
- 注意：部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息，我司不保證所提供信息的權威性，僅供客戶參考交流研究之用。
試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質保量，質量問題均可免費退換，另提供免費代測服務。
細胞售后：
1. 細胞運輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
3. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，未告知的視為產(chǎn)品合格。4-10天內出現(xiàn)問題，請?zhí)峁┘毎掌图毎霈F(xiàn)問題的照片以及細胞相關操作的詳細步驟，并跟我公司人員及時溝通判定是否重發(fā)，具體可以參照我官網(wǎng)或者隨貨說明書相關售后條款。
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