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卵巢癌完全培養基是一種為促進人源卵巢癌原代細胞體外生長而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5% CO2、37℃培養箱中平衡時,pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個合適的人源卵巢癌原代細胞體外培養環境,選擇性地促進體外人源卵巢癌原代細胞的生長。
2~8℃避光保存2個月內有效。
1.卵巢癌原代細胞培養
至少提前半小時使用稀釋后的Matrigel基質膠預鋪培養瓶/板,使用前吸棄基質膠,用稀釋液潤洗一遍。將分離并計數后的細胞懸液參考說明書表1中細胞數量接種于培養瓶/板,補加完全培養基至所需體積,輕輕搖晃混勻,75%酒精表面消毒后置37 ℃ 、5 % CO2培養箱培養;原代細胞初次接種后2-3 天內勿動(利于細胞貼壁),第一次換液建議換半液。
2.卵巢癌原代細胞傳代
鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度85~95%時即可傳代;培養箱中取出細胞,棄舊培養液,0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5min后拿出輕拍培養瓶/板側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況;細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養基終止消化,并將細胞轉移至離心管中,1500 rpm,3 min;棄上清,以1-5 mL條件培養基重懸細胞,活細胞計數,將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板,(不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量詳見說明書),補加培養基至所需體積,十字交叉混勻,培養容器75%表面消毒后置37 ℃ 、5 % CO2培養箱培養。其他步驟同上。