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TissueFAXS Spectra可實現7色及以上的全景連續光譜成像、多重熒光染色光譜拆分及血細胞或樣本自發熒光去除等功能。突破了傳統多通道熒光成像串色及拆色技術,無法對多色樣本成像和準確定量的限制,實現了多靶點的組織原位微環境單細胞準確定量分析。另外,還具有多層次的組織圖像識別和組織類流式分析功能,能夠準確識別復雜組織中的單細胞、特定結構區域(如腺體、腫瘤區域、血管、支氣管等)。在單細胞、組織結構、細胞空間信息等多個層面進行定位、定性、定量分析。包括對熒光標記蛋白、核酸等組分的染色強度和形態學多種參數進行定量分析;根據熒光標記和形態學參數進行樣本細胞亞型分析、篩選;細胞間位置關系和細胞空間分布量化等。
多光譜技術
TissueFAXS Spectra 全景組織多光譜成像分析系統,通過λ-stack 多光譜成像結合光譜拆分算法,明確了圖像中采集到每一個像素的信號分別是來源于哪些染料和各染料所占比例。這種技術解決了多色標記時,通道之間相互串色的問題,為后期圖像定量提供更加準確的信號強度及形態學信息。TissueFAXS Spectra 支持在其它TissueFAXS 系列(正置系統和倒置系統)產品上升級。
多光譜顯微成像主要應用在:腫瘤微環境研究,分子標志物研究,空間生物學研究,免疫表型分析,免疫浸潤分析等。
高通量循環免疫熒光染色及定量分析技術
高通量循環免疫熒光定量分析技術,通過在常規切片上進行多輪免疫熒光全景掃描,來構建高維信息圖像,可檢測多達60多種抗原信息。通過傳統免疫熒光及基于光和酸/堿催化氧化得熒光素失活過程,可大大降低自發熒光,隨著染色輪數得提升同時提升信噪比。相比TSA染色方法中因為熒光強度與蛋白表達量的非線性偶聯關系,無法通過熒光信號強度定量蛋白含量,高通量循環免疫熒光定量分析法原理操作簡單,成像速度快,染色通道數量多,還可通過TissueFAXS Cytometry定量分析技術,利用染色熒光強弱判斷單細胞蛋白表達量,并可以對任意通道任意信號(細胞、熒光探針、腫瘤組織、神經纖維等)的數量度/形態/位置/結構等進行深度大數據分析。
通過StrataQuest軟件的Sample Registration功能,可以選擇目標樣本進行疊加處理,獲得以DAPI為核心的多輪染色多通道疊加圖像。通過計算DAPI細胞核的情況,繼而對每個通道中細胞核、細胞質、細胞膜信號進行準確量化分析。
熒光樣本λ- stack 成像及光譜拆分
顯微成像領域,尤其是免疫熒光樣本成像中,當標記熒光素過多時,各個熒光素光譜發生重疊。采用傳統濾光片成像,單個通道會采集到多個熒光信號,發生通道串色現象,無法獲取純凈的單通道圖像。TissueFAXS Cytometry技術通過λ-stack多光譜成像結合光譜拆分算法明確了圖像中采集到每一個像素的信號分別是來源于哪些染料和各染料所占比例,解決了多色標記時,通道之間相互串色的問題,從而為后期圖像定量提供更加準確的信號強度及形態學信息。
自定義光譜建庫及動態拆分
TissueFAXS Spectra光譜建庫及拆分模式,采用靈活的自由組合策略,除了可以根據光譜庫中已有的相關染料、背景光譜進行多重染色信號拆解,也可針對不同自發熒光背景,實時獲取光譜數據并自動添加到拆分標準中。比如在高自發熒光背景信號的樣本中,分別扣除血細胞背景、膠原背景、多種組織背景等。光譜庫中目標熒光光譜數量與組織背景光譜數量可以無上限添加,在光譜掃描范圍內可拆分多種染色信號。
肝腫瘤組織10+1色免疫熒光及光譜拆分
基于多重染色的腫瘤免疫微環境的作用研究
組織原位細胞間的相互作用模式分析
上圖:巨噬細胞與T細胞距離與作用關系(巨噬細胞與T細胞在指定原位空間距離內位置關系與相互作用分析)下圖:腫瘤細胞與T細胞距離與作用關系(腫瘤細胞與T細胞在指定原位空間距離內位置關系與相互作用分析)
該解決方案不但能夠提供大量生物體原位中,組織與細胞形態學、蛋白組學以及空間距離分布的具體量化數據,更重要的是,提供了針對不同類型組織細胞的真實邊界及細胞中心的相互作用的大數據可視化解析。
腫瘤微環境中免疫細胞空間距離分布量化
案例為肝癌組織10色樣本,利用TissueFAXS Cytometry技術中Classifier功能對組織樣本腫瘤與間質區域進行特異性識別,以腫瘤區域為中心,微米級別精度對微環境中免疫細胞的空間分布進行單細胞量化分析。
右側散點圖中不同顏色點數表示距離腫瘤不同距離的免疫細胞浸潤數量,該量化數據對于腫瘤免疫分型,免疫細胞浸潤分析,藥物療效評估等方向研究具有重要意義。
生物體原位多表型細胞的量化分析方案
利用TissueFAXS Cytometry技術分析多色樣本,能夠在單細胞水平上識別不同通道染色的蛋白分子,并將其識別的參數(染色強度,面積,形態等)投射到類流式散點圖上,通過對不同坐標參數散點圖進行圈門篩選目標細胞,最終可以實現在一個散點圖分析得到不同染色共標的細胞群體。此技術不僅能夠方便我們在空間原位對表達不同蛋白的細胞類群進行個性化分類與分析,并且在發現可能具有特殊功能的少數細胞群落的作用上,也尤為關鍵。