Cell Biolabs品牌腺相關病毒（AAV）載體

腺相關病毒AAV具有表達滴度高、宿主免疫反應輕微、感染譜廣、安全性高等優勢，成為近年來在基因治療領域應用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理的Cell Biolabs （AAV Helper Free Expression System）的AAV三質粒表達系統也是目前常用的一類AAV載體系統。

如下圖所示，該套AAV系統包含表達載體（Expression vector）、包裝質粒（Rep-Cap plasmid）和輔助質粒（pHelper plasmid）。其中表達載體是AAV病毒的核心，包含了ITR序列、CMV啟動子、多克隆位點等，用于攜帶外源基因；包裝質粒負責表達AAV病毒的結構蛋白，決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復制缺陷型的，必須依賴輔助病毒（如腺病毒）才可以感染靶細胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質粒上提供這些必要的輔助基因來確保重組AAV病毒具有感染性，消除AAV對輔助病毒的依賴，解決了AAV生產過程中要去除腺病毒污染的難題。

      Expression vector包含ITR序列，多克隆位點，攜帶目的基因；

      Rep-Cap plasmid包含Rep和Cap基因，決定了重組AAV的血清型和組織嗜性；

      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2A和E4基因，使重組AAV具有感染性。
 

1. AAV表達載體

AAV基因組為4.7kb，能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8種AAV的表達載體，兼容常用的各種AAV包裝系統，表達載體都攜帶有2個ITR序列，使AAV基因組能正確形成T-形二級結構，進而保證了病毒的有效復制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點，還可以根據實驗需要選擇帶標簽、無標簽、不含啟動子或自身互補型（self-complementary）AAV表達載體（產品詳情如下表）。
 

2. AAV包裝質粒

AAV共有12個血清型，其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得，并且具有明確的的抗體反應性，是目前常用的經典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結構，但其衣殼蛋白在序列與空間構象上的多樣性，使得AAV與不同細胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面，AAV-2的感染譜較廣應用較多，AAV-1在骨骼肌中的轉導效率較高，AAV-3易于轉導巨核細胞，AAV-5和AAV-6感染呼吸道上皮細胞的優勢較為顯著。因此，根據AAV不同血清型在組織感染性的相對特異性，可以用于在針對不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體類型與組合。除了常見的六個血清型AAV之外，Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質粒即AAV-DJ與AAV-DJ-8，如下圖所示，這兩種AAV的Rep-Cap基因是由多個野生型AAV的結構基因重組而來，與其他野生型相比，AAV-DJ在體外細胞轉導效率更高，AAV-DJ-8則更適用于體內感染實驗。
 

以常用的AAV-2為參照，下表比較不同血清型AAV對種屬、組織細胞的感染率1。值得一提的是，AAV-DJ對不同物種的肝細胞、黑色素瘤細胞以及胚胎干細胞的感染能力都有絕對優勢，甚至高于常用的AAV-2。
 

輔助質粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質粒，pHelper載體中包含了腺病毒的E2A、E4基因和VA RNA，由于我們常用的AAV包裝細胞系293和293T都含有E1基因，因此該系統中的pHelper質粒上沒有再提供E1基因。
 

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Cell Biolabs品牌腺相關病毒（AAV）載體

西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統外，還有腺病毒（Adenovirus），慢病毒（Lentivirus）和逆轉錄病毒（Retrovirus）載體系統，為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產品庫，小編之后還會一一為大家介紹這些病毒載體，敬請期待！