產品介紹

    在二維凝膠電泳的實驗中，可以通過比較染色后的2張2D膠圖像中蛋白點的光密度值進行差異定量，或比較同種蛋白經同位素標記和未經標記的串聯質譜峰面積進行差異定量。但這兩種常用技術由于在樣品處理上費時費力，不利于大規模的蛋白質組定量。

    非標定量法（Label-free）是近年來重要的質譜定量方法，通過比較質譜分析次數或質譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數量變化。該技術無需昂貴的同位素標簽做內標，提高了低豐度蛋白質的檢測效率和蛋白質定量的準確性，廣受科研工作者的推崇。

    目前，已經有一系列配套的非標記定量分析軟件，其中包括的GE公司開發的DeCyder MSTM商業化軟件，領先的蛋白質組學定性定量算法MaxQuant。運用這些軟件，對液相色譜串聯質譜數據非標記定量分析是將質譜數據由譜峰形式轉化為直觀的類似雙向凝膠圖譜，譜圖上每一個點代表一個肽段，而不是蛋白質；再比較的不同樣本上相應肽段的強度，從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。實踐證明其具有很好的定量準確性和可信性，現在已經逐漸成為蛋白質組學領域內的標準解決方案。

特點：
1.對于液相色譜串聯質譜的穩定性和重復性要求較高；
2.改成無需昂貴的穩定同位素標簽標記樣本，實驗成本低；
3.對樣本的操作較少，并且不受樣品條件的限制；
4.可以檢測到的肽段動態范圍可以達到4個數量級以上，提高了低豐度蛋白質的檢測效率、非標記定量準確性。

注意：
1.非標定量方法可以大大減少樣本預處理的時間及樣品本身產生的干擾，并且可以實現最大量的定量及定性結果。
2.非標定量方法需要較好的色譜重現性，ESI噴霧連續性和污染物均會干擾其定量重現性。
3.非標定量方法需要進行正確的譜圖校正，否則將影響其定量準確性和重現性。

原理

非標定量法（Label-free）是通過比較質譜分析次數或質譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數量變化，認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關，因此蛋白質被質譜檢測的計數反映了蛋白質的豐度，通過適當的數學公式可以將質譜檢測計數與蛋白質的量聯系起來,從而對蛋白質進行定量。按照其原理主要分為兩種，第一種spectrum counts類的非標記方法，發展比較早，已經形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結果為定量基礎，各種方法的差別在于后期算法在大規模數據上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。