雜交瘤細胞株復蘇擴大

實驗過程及注意事項

郵寄活細胞時：收到細胞后直接將一支細胞轉到一個24T孔，放37℃co₂培養箱中培養過夜。約80%滿時擴大。加入等體積培養基(17%HT培養基)，吹打細胞面，將細胞完全吹落下來，混勻并擴至3-4孔飼養細胞孔，每孔補加新的培養基。

郵寄凍存細胞時：預先用17%胎牛血清DMEM培養基鋪好飼養層細胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養層良好的狀態是飼養細胞由圓形變為菱形，三角形等形狀。收到凍存細胞后，取出一管細胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000轉離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養基懸浮，轉至24孔培養板中，放至co₂培養箱中培養。

細胞凍存：細胞長至80%滿時將孔內細胞上清棄掉，使用移液槍將500ul凍存液吹打細胞面，動作輕柔，轉至細胞凍存管，放入凍存盒，并轉至-80冰箱，過夜后即可轉入液氮保存。

細胞復蘇：預先用17%胎牛血清DMEM培養基鋪好飼養層細胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養層良好的狀態是飼養細胞由圓形變為菱形，三角形等形狀。從液氮內取出一管細胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000轉離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養基懸浮，轉至24孔培養板中，放至co₂培養箱中培養。

注意事項：

   1.進入操作臺前所用任何物品須經酒精擦拭消毒，以防污染。

   2.移液槍使用時不要靠近火焰，使用前應多換氣。

   3.配置好的培養基放置4℃三天內可以使用。

   4.細胞傳代與細胞復蘇所用培養基應于實驗前一小時拿出，恢復至室溫方可使用。

   5.所需培養基和凍存液用之前進行無菌檢驗，以防污染。                 培養基：DMEM培養基+17%胎牛血清+HT

細胞凍存液：DMEM培養基：胎牛血清：DMSO=8：2：1

如有疑問請致電山東綠都生物食品安全檢測事業部 武經理 18266598399