豬圓環2型病毒診斷的高敏配對單抗值得信賴

豬圓環3型病毒診斷的高敏配對單抗值得期待

一，研究背景

豬圓環疫苗生產廠家多、疫苗類型多，細數下來有20-30種，圓環疫苗分為三大類：全病毒疫苗、嵌合疫苗、基因工程亞單位疫苗（真核表達和原核表達兩種）。我們常說圓環病是經濟病，因為它直接影響生產效率。如何選擇優秀的疫苗成為各級養殖場關心的問題。有文獻報道來自江蘇41個豬場272樣品中40份為PCV3陽性，且這40份樣品中28份為PCV2和PCV3共感染。 

   目前，豬圓環病的診斷是PCR和目測背部腹部的圓環斑點，以往，人們采用各種PCR的方法來檢測圓環病毒，但是PCR方法檢測繁瑣、對人員和環境要求高

，檢測成本高，不利于現場、基層檢測使用。現在主要集中的大型的正規的檢測中心，比如各農業大學的檢測中心等。

   應市場需要，我們山東綠都生物食品安全檢測事業部歷時2年時間，開發了6株鼠單抗，經過配對測試，找出3組均可以配對成功，并投入了市場進行臨床驗證，受到了客戶的一致好評，豬圓環2型病毒診斷的高敏配對單抗值得信賴，

豬圓環3型病毒診斷的高敏配對單抗值得期待，豬圓環3型配對單抗正在研發中。豬圓環2型配對單抗在售暢銷。

二，目的意義

1，所開發試紙條產品用于檢測各廠家圓環活疫苗中有效抗原的含量，指導客戶與有關監督部門考核產品。

2，所開發試紙條產品用于檢測各廠家圓環亞單位CAP疫苗中有效抗原的含量，指導客戶與有關監督部門考核產品。

3，所開發試紙條產品用于臨床病料的豬圓環病毒診斷，可用于唾液（因檢測的靈敏度高），血清，淋巴結（含毒量高）檢測豬圓環病毒。

三、鼠單抗質量鑒定

①免疫熒光鑒定

1.PK15細胞鋪96孔板一個，同時接毒，按照5%接毒，每孔接50ul。

   2.48小時測定熒光。用0.01Mpbs洗三次后棄掉pbs，拍干。

   3.加入冷乙醇（-20℃存放）固定20分鐘，放入-20℃后棄掉上清，不拍板。

4.pbs洗三次，棄上清，不用拍板，吸干水分。

5.加入一抗，按照0.1 mg/ml加入。37℃防置40分鐘，pbs洗三次，吸干水分。

6.加入二抗（按1:40加入，pbs稀釋）37 ℃防置40分鐘。Pbs洗4次，吸干水分，不拍板，觀察。

7.顯微鏡亮度：1.5亮度

注意：1.做不接毒的空白細胞對照。

         2.pbs洗要同一位點加入，要溫柔。

         3.鋪板同步接毒。

細胞株Mabs：6E11 7F3 4E11 1E1 5C2 4E10 均具有強熒光。 可用于免疫熒光，WB,ELISA,IHC等體外免疫診斷。 

所開發試紙條產品顯示： 1，所開發試紙條產品用于檢測各廠家圓環活疫苗中有效抗原的含量，可以將油佐劑疫苗冷凍破乳化，但不可以用乙醇和二甲基亞砜等使蛋白變性的有機溶劑破乳化。

2，所開發試紙條產品用于檢測各廠家圓環亞單位CAP疫苗中有效抗原的含量。

3，所開發試紙條產品用于臨床病料的豬圓環病毒診斷，可用于唾液（因檢測的靈敏度高），血清，淋巴結（含毒量高）檢測豬圓環病毒。

配對情況：5C2-4E11；5C2-6E11

推薦使用濃度： 膠體金： 5微克/ml金液，劃線0.3-0.6mg/ml

                ELISA： 1：50 000-50 0000

                WB及免疫組化，免疫熒光：1:50-1：500

③ 特異性、符合率、穩定性、靈敏度、假陽性率、假陰性率

特異性： 本配對抗體開發的試紙條產品只識別圓環2型病毒和亞單位cap2。

符合率：本試紙條與IDEXX產品符合率為98%,與PCR符合率99%。

穩定性:  本試紙條常溫的保質期為36個月。

靈敏度： 不低于PCR的靈敏度。

假陽性率： <5%

假陰性率:   0%

• 配套羊抗鼠二抗與萬能C線反應蛋白； PCV純化標準陽性 抗原。

五、產品說明書附錄

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