目標區域測序是針對研究者感興趣的基因組序列，通過定制目標區域的探針/引物，與基因組進行雜交/擴增，將目標區域DNA富集后進行高通量測序的研究方法。iGeneTech®動植物目標區域捕獲主要依托于自主研發的液相芯片捕獲（TargetSeq®）和多重PCR擴增（MultipSeq®）兩套核心技術。
iGeneTech®多重PCR擴增子技術（MultipSeq®）采用兩步PCR擴增方法來完成目標區域擴增及富集的目的，是一種目標區域高通量測序技術。擴增子測序具有操作簡便、模板要求低、捕獲效率高、應用靈活、價格低廉、分析簡單等優點。利用高深度測序，多重PCR擴增子測序可以檢測全基因組測序、外顯子組測序不能涵蓋的，復雜樣品中的超低頻突變。
iGeneTech®液相雜交捕獲技術（TargetSeq®）基于熱力學穩定性算法對目標區域基因組進行探針設計，然后合成出有效的特異性探針，進而與基因組DNA進行液相雜交，將目標區域序列進行捕獲并富集后，使用主流的測序平臺進行高通量測序。該技術適用于基因組大區域、長片段、CNV突變及基因融合事件的檢測，并且支持多個物種、任意區域的設計。通過對大量樣本的目標區域研究，有助于發現和驗證疾病相關的目標基因和關鍵位點。
產品優勢
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◇ 針對性強：對關注的連續區域或特定SNP位點進行捕獲測序。 |
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◇ 精準度高：高深度測序保證了更準確的測序結果。 |
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◇ 效率更高：基于二代測序技術平臺，更高速、高效。 |
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◇ 定制化服務：按需定制高性價比Panel，可提供試劑盒定制與科技服務。 |
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◇ 成本優勢：只針對目標區域測序，大大降低了研究成本。 |
技術路線
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樣本要求 |
DNA≥1 μg（濃度≥25 ng/μL） |
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捕獲平臺 |
TargetSeq®、MultipSeq® |
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測序策略 |
PE150，數據量根據檢測項目決定 |
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服務周期 |
TargetSeq®：第一輪測試數據（35個自然日）＋技術服務（15個自然日）=50個自然日
MultipSeq®：第一輪測試數據（30個自然日）＋技術服務（15個自然日）=45個自然日
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文獻案例
發表雜志：Molecular plant IF：9.326 發表年份：2017
該研究首先通過乙基甲酸鹽（EMS）處理B73獲得玉米突變體庫，然后利用外顯子捕獲測序技術來檢測突變位點在基因中的位置，分析這些位點對基因造成的影響，從而得到了大規模的玉米突變體遺傳變異信息。通過對1,086個M1突變株進行測序，鑒定出195,268個由CG變為TA的點突變和4,610個InDel，包括啟動子及終止子的獲得或丟失、剪切位點突變、各種非同義的蛋白質突變等。這些突變都是潛在的導致蛋白發生變化的突變。經分析發現，這些突變分布在32,069個基因上，覆蓋了82%的玉米蛋白質編碼基因；且平均每個突變株有180個突變位點，平均每個基因就含有6.1個這種能導致基因編碼的蛋白發生改變的突變位點。另外，在14,101個基因的起始密碼子、終止密碼子的突變或錯誤剪切位置鑒定到多達27,214個突變位點，其中6,232個基因攜帶至少兩個這樣的突變。該研究為下一步深入挖掘玉米基因組中的優異基因并對其進行功能解析提供了快捷的方法和思路，為玉米的遺傳改良提供了寶貴資源和更多的可能。
圖1 1086個EMS突變株中CG＞TA突變（MAF % 0.05）分布、功能注釋和基因覆蓋情況
參考文獻
Lu X, Liu J, Ren W, et al. Gene-indexed mutations in maize (Zea mays)[J]. Molecular Plant, 2017, 11(3).
