SW620（人結(jié)腸癌細(xì)胞）百歐博偉生物 細(xì)胞系
 
一、細(xì)胞簡介
平臺(tái)編號(hào)：bio-73166
拉丁屬名：SW620
細(xì)胞名稱：SW620（人結(jié)腸癌細(xì)胞）
種屬：人
年齡（性別）：男；51歲
組織來源：結(jié)直腸腺癌，來自轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景描述：SW620細(xì)胞是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到的，由A·Leibovitz等從一個(gè)淋巴結(jié)建株。SW620細(xì)胞主要由無絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成;SW620細(xì)胞僅合成少量癌胚抗原(CEA)，在裸鼠中有高度的致瘤性。
生長培養(yǎng)基：DMEM高糖(貨號(hào):PM150210)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
運(yùn)輸方式：快遞干冰運(yùn)輸（1 vial）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）。
注意事項(xiàng)：(1)嚴(yán)格無菌操作；
(2)本產(chǎn)品只供科研使用，不可應(yīng)用于臨床。
 
二、SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞)生長：初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后，經(jīng)過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細(xì)胞生長，一周內(nèi)便可連接成片。接種細(xì)胞長滿瓶壁后，應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng)。否則由于營養(yǎng)物消耗和代謝積累，細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物，為膨脹的線粒體，SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞)質(zhì)呈空泡化，細(xì)胞變圓、粗糙，嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落，只有及時(shí)再做傳代處理，才能使細(xì)胞繼續(xù)生長繁殖。
 
三、SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞)功能：
（1）血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化：
（1）主動(dòng)脈硬化。
（2）主動(dòng)脈瘤
（3）主動(dòng)脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
（2）鑒定：肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
（3）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細(xì)胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗(yàn)證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
 
四、SW620（人結(jié)腸癌細(xì)胞）具體操作
1、處死孕鼠，全身置于75%酒精里浸泡，然后在超凈臺(tái)中用剪刀和鑷子將孕鼠皮膚剪開，用另外一組剪刀、鑷子剪開腹部肌層，露出子宮，*后用第三組剪刀和鑷子將子宮小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中，沖洗去血。
2、用兩把彎鑷子將胚胎外的胞膜小心去除，然后夾掉頭和內(nèi)臟，將其余胚胎轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30 ml D-PBS的50 ml離心管中，輕輕顛倒兩次，倒掉D-PBS，再重復(fù)此步驟一次，注意要留少許D-PBS，然后將胚胎轉(zhuǎn)移到另一裝有D-PBS的平皿中，并用手術(shù)刀片將其細(xì)細(xì)切碎。
3、用200 ul的移液槍反復(fù)、快速地吹打平皿中的液體，轉(zhuǎn)移至15 ml離心管中，于4℃ 1500 rpm離心5分鐘，倒掉上清，以10 ml胰酶重懸沉淀，放在37℃水浴中消化30分鐘，且每隔五分鐘輕輕晃動(dòng)，使之充分消化。
4、將上層細(xì)胞懸液倒入一個(gè)裝有10 ml MEF生長培養(yǎng)基的50 ml離心管中，用200目的尼龍網(wǎng)過濾后，以1 500 rpm離心5分鐘收集細(xì)胞，再用30 ml MEF生長培養(yǎng)基洗滌兩次。
5、細(xì)胞沉淀用15 ml MEF生長培養(yǎng)基重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)(一般8只14天的胎鼠可獲得2-3x107細(xì)胞)。
6、3x106細(xì)胞懸浮于15 ml MEF生長培養(yǎng)基中，接種到200 ml培養(yǎng)瓶中。
7、24小時(shí)后更換新鮮的MEF生長培養(yǎng)基。
8、細(xì)胞長滿后，先用D-PBS沖洗，倒掉后加胰酶消化(此步時(shí)間不宜過長，作者一般不超過五分鐘)，按1:5傳代。
9、細(xì)胞再次長到覆蓋率80-90%左右，將其消化后，常規(guī)凍存(凍存液要現(xiàn)配)。
 
五、注意事項(xiàng)
1、原代培養(yǎng)，一定要避免污染。
2、MEF生存能力有限，如果不凍存，體外存活十代左右。
3、凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞只能傳代一次，因?yàn)檫@些細(xì)胞繁殖能力有限。
4、消化細(xì)胞時(shí)間不要過長。

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