人腦動脈血管組織提取物的背景與應用！
 

一、背景
 
人腦動脈血管組織提取物來自新鮮或冷凍人腦動脈血管組織可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。人腦動脈血管維持血管內外的動態平衡，合成和分泌細胞因子和介質，維持凝血和纖溶的動態平衡。
 
腦血管結構特點：1）腦外動脈屬于肌型動脈，內彈力膜較厚，中膜及外膜較薄，彈力纖維較少，動脈搏動幅度較小，增厚的內膜可緩沖動脈對管壁的沖擊，對腦起保護作用。腦外血管神經豐富，大的血管外膜有神經纖維束伴行，與血管收縮及舒張有關。2）腦動脈可分為中央支與皮質支，均垂直進入腦實質，二者在腦內有廣泛的吻合支。3）血液與腦組織間存在血腦屏障（BBB），它由腦的連續毛細血管內皮及其細胞間緊密連接、完整的基膜、周細胞及星形膠質細胞腳板圍成的神經膠質膜構成，內皮是BBB的主要結構。4）腦靜脈壁薄，既無平滑肌又無瓣膜，腦靜脈血管缺乏收縮功能。椎動脈、鎖骨下動脈與頸外動脈側支循環，包括椎動脈的寰椎動脈與頸外動脈的枕動脈吻合；鎖骨下動脈的頸深動脈與頸外動脈的枕動脈吻合；左右頸深動脈間及左右枕動脈間吻合。各腦動脈終末支吻合，包括大腦前-大腦中動脈終末支間吻合，大腦前-大腦中-大腦后動脈終末支間吻合形成的側支循環。
 
二、應用
 
用于腦動靜脈畸形臨床病理與血管平滑肌細胞的相關生物學研究：
 
腦動靜脈畸形栓塞治療后的組織病理及免疫組化研究目的分析人腦動靜脈畸形（CAVM）栓塞治療后的組織病理變化。方法對11例行血管內栓塞治療術后再作手術切除的CAVM的病理資料進行分析，并應用增殖細胞核抗原（PCNA）、骨橋蛋白（OPN）、α—平滑肌肌動蛋白（α—SMA）、血管內皮生長因子（VEGF）等單克隆抗體進行免疫組織化學分析。
 
結果栓塞治療后，CAVM血管腔內出現不同程度的血管內、外的炎性反應。表現為管壁及管周的淋巴細胞浸潤、管腔內的內膜增生和異物巨細胞聚集等。部分被栓塞的血管腔內出現血管再通；免疫組化分析表明，新生內膜中SMA陽性染色，表明血管平滑肌細胞（VSMC）參與新生內膜的形成；OPN在新生內膜及異物巨細胞中有強陽性表達；畸形血管團周圍組織中發現異常微血管，其內皮細胞PCNA陽性染色率高，并且VEGF呈陽性染色，表明有活躍的血管生成。栓塞治療后，畸形血管周圍組織中血管內皮細胞的增殖指數（19.6±8.4，％）高于作為對照組的出血性CAVM患者（10.1±6.2，％），差異有顯著性意義（P＜0.05）。結論栓塞材料引起血管不同程度的炎性反應，適度的血管反應有助于管腔的閉塞；栓塞的血管部分有再通現象；栓塞治療后畸形血管團周邊有微血管增生跡象。
 
VSMC是血管壁最主要的細胞成分，其生物學行為與CAVM的病理狀態關系密切。本研究旨在建立一個穩定的人CAVM血管平滑肌細胞的培養體系，以作為體外研究的細胞學模型。
1、方法：取手術切除的人CAVM組織塊用膠原酶消化法接種于鋪有膠原底層的培養瓶中進行原代及傳代培養，并對其進行形態學觀察、免疫組化染色及透射電鏡等一系列細胞定性研究。
2、結果：接種后6-8d后可見即可見少量細胞貼壁，原代培養的細胞呈長梭形，具有“峰”、“谷”樣生長特征；免疫組化顯示95％以上的細胞為SMA陽性染色，而CD34陰性染色；透射電鏡檢查發現培養的細胞具有肌絲及密斑等結構。從不同角度鑒定了所獲細胞具有CAVM的特征，而且細胞純度較高。細胞可以連續傳代。
3、結論：應用酶消化法可獲得純化的血管平滑肌細胞，細胞可以連續傳代培養。體外CAVM的血管平滑肌細胞可作為細胞學模型用于深入研究。
 
不同培養條件對體外腦動靜脈畸形VSMC增殖和遷移的影響目的研究不同培養條件對體外CAVM的血管VSMC增殖、遷移的影響。方法應用細胞計數繪制生長曲線、MTT法檢測堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對體外培養的人CAVM的VSMC增殖的影響，并應用用逆轉錄—聚合酶鏈反應（RT-PCR）及免疫印跡的方法分別檢測它對VSMC表達骨橋蛋白（OPN）基因和蛋白的影響；用細胞遷移模型觀察骨橋蛋白對VSMC遷移能力的影響。結果：細胞計數分析表明，bFGF作用于VSMC后，細胞增殖明顯加速。
 
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