人腎細胞腺癌細胞的培養方法與注意事項！
 

一、ACHN細胞概述
細胞名稱：人腎細胞腺癌細胞
組織來源：腎轉移灶：胸腔積液
細胞種屬：人源
生長特性：貼壁
培養基：MEM
形態特征：上皮細胞
傳代方法：每周2-3次更換新鮮培養基，1:2至1:3比例傳代培養
培養條件：胎牛血清至最終濃度為10％。環境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃
細胞描述：源自22歲高加索男性，皮下接種至裸鼠體內21天100%發展成腫瘤
細胞凍存：液氮凍存（凍存液基礎培養基+20%FBS+10%DMSO）
細胞運輸：干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）
 
二、ACHN細胞注意事項
復蘇細胞接收后的處理：
1、收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2、75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3、建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
 
三、細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
 
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