小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的處理方法與培養步驟！

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

一、細胞簡介
平臺編號：bio-73131
拉丁屬名：RAW 264.7
細胞名稱：RAW 264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）
種屬：小鼠
年齡（性別）：雄；成年
組織來源：Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
生長特性：貼壁
細胞形態：不規則形
背景描述：RAW 264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW 264.7細胞不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。RAW 264.7細胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導RAW 264.7細胞分解紅血球，但對腫瘤靶細胞無作用。
生長培養基：DMEM高糖(貨號:PM150210)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)
培養條件；氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
說明書下載：RAW 264.7.pdf

二、細胞特性
1）來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
2）含量：>1x106 個/mL
3）形態：不規則圓形，傳代時密度要大，易分化
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

三、運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

四、細胞用途：僅供科研使用。

五、細胞接受后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的完全培養基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
                     
六、細胞培養步驟

培養基及培養凍存條件準備：
1）準備DMEM培養基；北美胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、用細胞刮鏟將細胞從培養瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內。
3、在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4、將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

下面T25瓶為例；
1、細胞凍存時，用細胞刮鏟將細胞從培養瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內。可使用血球計數板計數。
2、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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