將委托方提供的DNA顯微注射到150個受精卵。注射后的受精卵移植到5至6只代孕母鼠輸卵管中。小鼠出生后3周,取其尾巴送至委托方手中作PCR鑒定。如果每個DNA沒有獲得至少3個首代轉(zhuǎn)基因小鼠,則免費繼續(xù)注射100個額外的受精卵。如果第二次注射后仍未獲得首代轉(zhuǎn)基因小鼠,將不再進行顯微注射,平臺將與委托方討論進一步的措施。出生后4周,將小鼠隔離并送交委托方。
聯(lián)系人:丁小燕研究員 董娟
聯(lián)系電話:021-54921411 54921358
E-mail: xyding@sunm.shcnc.ac.cn, dongjuan@sibs.ac.cn
成功案例介紹:
委托方提供線性化DNA LFM1a ,2009年3月12日和13日第一批注射62個受精卵,移入4個代孕母鼠輸卵管中,其中3只受體鼠懷孕并生產(chǎn),獲得小鼠11只,將11只小鼠剪尾抽提基因組DNA,經(jīng)PCR鑒定,獲得6只轉(zhuǎn)基因陽性小鼠,如圖所示。
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干細胞技術(shù)平臺作為生物化學與細胞生物學研究所核心平臺的成員之一,在研究所加強發(fā)展技術(shù)支撐工作的背景下,于2006年10月正式成立(http://www.sibcb.ac.cn/cp13-2.asp)。平臺現(xiàn)有細胞培養(yǎng)室4間,其中2間為百級凈化工作間,其內(nèi)配備有百級凈化工作臺、CO2培養(yǎng)箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、臺式低速離心機等基礎設施。平臺現(xiàn)有飼養(yǎng)層細胞如昆明白、CF-1、ICR、等多種品系小鼠的飼養(yǎng)層細胞,帶有單抗性基因(抗G418、嘌呤霉素)的飼養(yǎng)層細胞,帶有四抗性基因(抗G418、6-thioguanine, puromycin 和hygromycin )的飼養(yǎng)層細胞,人包皮成纖維細胞;有小鼠胚胎干細胞系如R1、E14、CE-3、D3;有小鼠的iPS細胞系;有人胚胎干細胞系如HN4。平臺還備有工具小鼠如CF-1、ICR、Neo、NOD/scid、Rosa 26 (β-gal)等。平臺現(xiàn)具備的能力:1)小鼠胚胎干細胞基因操作如同源重組、隨機插入等,建立穩(wěn)定的細胞系。2)小鼠胚胎干細胞、人胚胎干細胞定向分化操作能力。3)轉(zhuǎn)基因小鼠制備。目前,平臺可為所內(nèi)外提供胚胎干細胞相關(guān)技術(shù)培訓和技術(shù)服務。