鴨病毒性腸炎（DVE），又名鴨瘟（DP）是由鴨病毒性腸炎病毒（DEV）引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。傳播迅速，發病率和死亡率都很高，給我國養禽業造成巨大的經濟損失。在鴨病毒性腸炎的免疫預防工作中，接種了鴨病毒性腸炎疫苗后，由于多種因素可能導致免疫鴨不產生或產生低水平鴨病毒性腸炎病毒抗體。

gB蛋白是病毒的囊膜蛋白，具有吸附、穿入、融合細胞以及細胞間傳播功能，具有良好的反應原性及免疫原性，誘導機體產生高水平的體液和細胞免疫反應。本試劑盒采用酶聯免疫吸附試驗檢測鴨血清中抗鴨病毒性腸炎病毒gB蛋白抗體IgG。用于免疫鴨病毒性腸炎疫苗后的抗體動態水平監測，指導免疫預防工作，評估鴨病毒性腸炎免疫狀況，也可用于該病的流行病學調查。

【產品內容】

【成分性狀】

【用法與判定】

1、需要自備的器材

1.1微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標儀；

1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備

用樣品稀釋液將待檢血清樣品進行100倍稀釋（建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應無溶血現象發生；②不能稀釋陰性、陽性對照。

3、操作步驟 （﹡使用前應輕輕旋轉或震蕩予以混勻，所有試劑應恢復至室溫）

3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照；

3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照；

3.3  取100μl經1：100稀釋好的待檢樣品加入相應孔中，并做好記錄；

3.4  37℃孵育1h；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結晶，需先溶解后，方可進行稀釋）進行洗板，重復5次，每次30s；

﹡加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結果，盡量將孔內洗滌液拋甩干凈；

3.6  每孔加100μl酶標結合物；

3.7  37℃孵育1h；重復步驟3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；

3.10 每孔加100μl的終止液；

3.11 立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、試驗有效性判斷

4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD₄₅₀值≤0.2；

4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD₄₅₀值≥0.4；

4.3臨界值(C.O.)計算：臨界值=0.2+陰性對照均值；陰性對照OD₄₅₀值大于0.2時應舍棄，如所有陰性對照OD₄₅₀值均大于0.2時須重復實驗；陰性對照低于0.05時以0.05計算。

4.4結果判定： 檢測樣品OD₄₅₀值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性； 檢測樣品OD₄₅₀值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。

【注意事項】

（1）待檢血清樣品數量過多時，應先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統一將血清樣品加入酶標板中，使反應時間一致。

（2）試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。

（3）底物液和終止液對皮膚有刺激性，注意防護。

（4）底物液不要暴露于強光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。

（5）所有試劑應在2～8℃存放；使用前恢復到室溫，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止試劑盒組分受到污染。

（7）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

（8）操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。

【規格與包裝】96T×2

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為6個月

僅供獸醫診斷使用