上海凈信高通量組織研磨儀對包涵體（大腸桿菌）蛋白質提取的研磨方法

實驗目的

對大腸桿菌進行破壁，提取其蛋白質。

實驗原理

通過研磨珠的撞擊，破碎大腸桿菌的細胞壁，使其內容物流出，進而提取其蛋白質。

實驗材料和器具

樣品：大腸桿菌

儀器：全自動樣品冷凍研磨儀（上海凈信，JXFSTPRP-96）

耗材：離心管，研磨珠（上海凈信，1mm）

實驗步驟

1.IPTG誘導表達的大腸桿菌細胞經離心后棄沉淀，在加入10ml PBS重懸細胞團塊后，以移液槍將其加入含有1mm玻璃研磨珠的離心管中；

2.將上述離心管放入多樣品組織研磨機中，在65HZ條件下震蕩90s；

3.取出離心管在4^o c離心，保存上清液S1，以備上述檢測；

4.向每個1mm玻璃珠離心管中加入1ml 8M 尿素溶液后，再放入多樣品組織研磨機中，在65HZ條件下震蕩90s,可見混濁液變清；

5.離心后收集上清液S2與S1（各10ul）在SDS-Page上電泳檢測。

實驗結果

      圖注：泳道3：marker

            泳道2：0號對照

            泳道1:含8M尿素上清

            泳道0：bingding buffer 上清

泳道      0        1       2      3

本蛋白形成包涵體，在使用此研磨機后進行上樣電泳。圖譜清晰，說明本研磨機適用于含包涵體菌體的破碎。