高通量組織研磨儀針對果蠅RNA提取的研磨方法

實驗目的

對果蠅進行研磨，提取其RNA。

實驗原理

通過研磨珠的撞擊，充分研磨果蠅，進而提取其RNA。

實驗材料和器具

樣品：果蠅
儀器：高通量組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）
耗材：離心管，不銹鋼研磨珠（上海凈信，6號）

實驗步驟

1.取5-10只果蠅放入研磨管中，蓋緊研磨管. 加入研磨珠,13Hz,1min,充分勻漿（時間可根據樣品本身的難易程度來調節，難磨的樣品，可以延長時間，如一次運動兩分鐘還不是很充分，可以間隙的重復工作幾次）
2.將研磨管放入高通量組織研磨儀中，60M/S研磨30S
3.機器停止后，取出研磨管，放入冷凍離心機中，于4度，10000g離心10分鐘
4.小心吸取上清液500µL至新的1.5ML離心管中，蓋上管蓋，在室溫上孵育15分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明，如果仍有少量顆粒屬于正常情況，不影響RNA提取質量和得率。
5.在1.5ML離心管中加入100µL氯仿，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種，于4度，12000g離心15分鐘。離心后混合物分層：上清層，中間層，下層；RNA存在于上清層中。
6.將上清層小心轉移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇，顛倒振蕩混勻，將混合的樣品在-20度條件，孵育20分種，于4度，12000g離心10分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底。
7.小心棄去上清，用0.2體積的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌離心管管壁，并旋渦振蕩樣品，盡可能讓沉懸浮，于4度，12000g離心5分鐘，再次去除上清，晾干沉淀。
8.操作的最后，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥，那樣會降底它的可溶性）。
9.用適量（一般可用50—100µL）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA，保存于-70度。