目前, 實驗室微生物的污染情況普遍存在, 主要是細菌、真菌和支原體等, 極易引發(fā)生物安全事件。為了保證實驗的準確性和科學性, 保證實驗室的生物安全, 控制實驗室微生物污染已經(jīng)成為實驗室重要的安全管理工作。

一、實驗室微生物污染的狀況及危害
實驗室生物安全管理工作困難重重;細胞實驗室培養(yǎng)過程中生物性污染是一個主要問題;在食用菌的菌種培養(yǎng)實驗室, 雜菌的污染是一個比較普遍存在的現(xiàn)象;在高致病性病原微生物實驗活動中, 為了確保實驗結(jié)果的準確性, 消滅雜菌顯得尤為重要, 如結(jié)核病的診治主要依賴于該菌的實驗室分離和培養(yǎng), 同時, 高致病性的病原微生物可能引起實驗室工作人員的感染, 甚至造成社會人群的感染, 嚴重危害環(huán)境安全和公眾健康, 從而造成社會恐慌;在疾控部門的微生物實驗室, 培養(yǎng)基雜菌污染現(xiàn)象極為常見, 而培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)系到檢驗結(jié)果的可靠性、權(quán)威性;醫(yī)院檢驗科集中了醫(yī)院送檢的人體血液、體液、排泄物、分泌物等各類標本, 這些標本大多帶有致病微生物, 并且在檢驗過程中產(chǎn)生的氣溶膠會污染空氣, 從而影響實驗結(jié)果的準確性。

二、實驗室微生物污染的原因
實驗室培養(yǎng)環(huán)境中的物理化學以及生物因素都可能是污染的原因, 其中, 以生物性污染最為常見。并且, 微生物的污染也是最難控制的。導致實驗室微生物污染的原因主要有: (1) 培養(yǎng)基滅菌操作不規(guī)范; (2) 在實驗活動中, 微生物隨著實驗操作產(chǎn)生的氣溶膠而擴散, 并污染實驗環(huán)境表面, 尤其是氣溶膠中的霉菌, 在空氣中附著在塵埃上, 形成一定粒徑的生物性粒子而懸浮, 直接污染實驗室環(huán)境; (3) 不同人員在理解與執(zhí)行等方面還存在很大的偏差, 造成理論與實際情況的嚴重脫節(jié), 容易使實驗室管理人員感到困惑; (4) 實驗室進出人員較多, 攜帶的微生物導致空氣污染。

三、控制實驗室微生物污染的措施
根據(jù)實驗室微生物污染的原因, 可以通過以下措施控制污染。
⒈實驗室各項指標應符合消毒滅菌的標準
1) 儀器設備的安全。儀器設備的正常運行是生物安全的重要保障, 是控制微生物污染的基本要求, 特別是冰箱、超凈工作臺、干烤箱和高壓蒸汽滅菌器等儀器設備直接影響了實驗室和實驗試劑的無菌程度。
實驗用品如培養(yǎng)皿、試管等, 按照浸泡、刷洗、沖洗、滅菌等步驟嚴格清洗。應用高壓蒸汽滅菌的物品不能裝得過滿, 玻璃制品、金屬器械等物品先高壓蒸汽滅菌然后在干烤箱中烘干。實驗用品滅菌后不易存放, 沒有及時使用的, 在下次實驗前仍需重新滅菌。
2) 實驗室環(huán)境的無菌化。實驗室環(huán)境微生物污染主要是空氣污染, 空氣消毒的方法很多, 化學消毒方法效果明顯, 但多數(shù)具有腐蝕性, 可持續(xù)效果差;物理消毒方法往往有其局限性;中草藥殺菌成分的研究仍需加強。因此, 克服單一消毒方法, 采用多方法相結(jié)合對實驗室空氣進行消毒。按時通風換氣, 同時通過過濾設備對進入室內(nèi)空氣中的非生物和生物粒子加以控制, 如體積小、移動方便、操作簡單的空氣凈化器, 可在有人活動的情況下使空氣中的菌量保持較低水平。化學消毒劑的種類很多, 如甲醛, 可以消滅結(jié)核桿菌、銅綠假單胞菌噬菌體、脊髓灰質(zhì)炎病毒等, 但是對人體有一定的毒性, 使用后要及時通風;過氧乙酸、乳酸是一種廣譜殺菌劑, 過氧乙酸噴霧消毒效果良好, 但是對粘膜具有刺激性, 對金屬有腐蝕性且穩(wěn)定性不夠好;臭氧具有消毒無死角、維持時間長等優(yōu)點, 但是對人體同樣有一定危害, 需要充分的通風降低其含量;高濃度的消毒靈可以消滅空氣中的霉菌。蒼術(shù)、艾葉、大青葉等中草藥煙熏均有不同程度的空氣滅菌作用, 但是原料價格高和煙熏的二次污染問題還善待解決。對于要求嚴格的實驗室, 如細胞室, 還需要控制實驗室的溫度和濕度, 保持干燥與清潔來切斷微生物傳播途徑。
實驗室通常用1‰的新吉爾滅定期對實驗室桌面消毒, 實驗室空氣用紫外燈消毒, 有研究證明紫外線對表皮葡萄球菌、粘質(zhì)沙雷菌、枯草芽孢桿菌繁殖體和氣溶膠殺滅率可達99。5%以上。培養(yǎng)箱內(nèi)所有可拆卸的配件經(jīng)75%乙醇擦洗后, 高壓蒸汽滅菌, 安裝之前用二次蒸餾水擦洗內(nèi)膽及配件。超凈工作臺使用前后確保紫外線照射60min, 使用時用75%乙醇認真擦拭臺面, 經(jīng)常清掃, 被雜菌污染的培養(yǎng)物要及時運出去處理。實驗室的廢棄物不能視為生活垃圾處理, 如標本、離心管、培養(yǎng)皿等需要高壓蒸汽滅菌, 棉簽、吸水紙等一次性使用的污染材料焚燒后再處理。
⒉培養(yǎng)過程中抑制雜菌生長
準備原料盡量做到?jīng)]有剩余, 每次實驗都使用新的培養(yǎng)液, 如有剩余要妥善保存, 盡快使用。培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)液或培養(yǎng)基可以通過加入二性霉素25~50U/mL抑制真菌污染, 培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)液可以通過加入硫酸、漂白粉、青霉素、克菌靈等抑制雜菌污染。
⒊保持菌種的優(yōu)良
在實驗用菌種可選的情況下, 用品質(zhì)優(yōu)良、抗污染的菌種, 定期更新菌種。優(yōu)良菌種要用適宜的方法保存, 盡量避免多次傳代導致的菌種退化或者菌種變異。
⒋建立完善的實驗室規(guī)章制度
在運行中不斷完善實驗室規(guī)章制度, 并在醒目位置懸掛。對本實驗室工作人員及外來人員及時培訓, 加強管理, 提高其生物安全管理意識, 增強自身操作能力。盡量減少無關(guān)人員進出實驗室, 進入實驗室必須穿滅過菌的工作服, 再用75%乙醇擦拭手部、腕部, 實驗操作時動作輕柔, 避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。對于實驗室的工作人員及日常養(yǎng)護人員采取培訓、考核的制度, 組織相關(guān)人員對生物安全管理進行交流及學習。根據(jù)需要增加實驗室防護設備, 如洗眼裝置、消毒器具、生物安全柜等。

總之, 控制實驗室微生物污染的措施很多, 單一方法必然具有局限性, 效果不佳, 尤其是細菌污染, 細菌的細胞壁成分復雜, 對消毒劑的敏感程度具有選擇性, 可以根據(jù)所操作的病原微生物進行滅菌驗證。不同實驗室由于實驗內(nèi)容和微生物污染的種類不同, 應根據(jù)本實驗室的實際情況選擇多種方法結(jié)合的控制措施。