臨近開學，
我司技術支持
（兼心理輔導師）
還會經常收到這樣焦慮的問題：
“ 老si，你好，
如何才能收獲一盤漂亮的細胞呢？
為啥別人家的細胞養得那么好呢，
我的就一言難盡呢”

養出漂亮細胞 這個事兒本就說來話長~
前幾期話題，我們給大家講過
細胞貼壁、老化、成團、
凍存、復蘇、污染等問題 。
這次小編又整理了一遍，
先看看這些基本點是否都做好了
 

絕對的無菌意識
1. 細胞剛拿到手最好先做一下支原體檢測，發現有污染迅速處理掉。
2. 嚴格無菌操作，BI也提供Pharmacidal噴壺，有效預防真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。
3. 真的不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套！
4. 水浴鍋很臟，可用BI Aquaguard-1 消毒水盤，效果非常好。
5. 最好是同一時間只有一個人在細胞房養細胞。

用好培養基和血清
1. 養細胞之前，就要先了解細胞的來源、種類、名稱，查閱一定量的文獻，確定所需培養基種類及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是補充細胞生長因子，提供細胞生長所需的蛋白質、脂肪、糖類、不同細胞對生長因子的要求也不一樣。血清替代物取代血清補充生長因子和蛋白質，但不一定是最適合細胞的，因此使用時要注意，避免引起細胞分化或老化。
3. 這里我們順便說一下常見的血清沉淀：血清沉淀是血清纖維的凝集，不影響細胞生長，不必驚慌！我們建議2000rpm離心5min取上清即可，并不影響血清質量。
4. 如果細胞活力差，可增加血清濃度到20%， 給細胞較多的生長因子，等細胞長起來再降回原來的濃度。
 

了解細胞生長習性 
不同的細胞生長習性不同，了解細胞生長習性，正確計數，才能掌握好傳代密度。對于一般細胞株，控制在三天一傳，是比較合適的，細胞不會太擠也不會太寂寞。但例如癌細胞，一發起瘋來半天就可以傳代，不及時換液或擴增分分鐘會餓死或擠死。
所以剛開始接觸一款細胞，要勤觀察，及時掌握它的生長情況。掌握細胞的生長節奏之后可以變成一天一看或兩天三看，畢竟太頻繁的把它從培養箱里拿出來也不太好。
 

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是對細胞的一種折磨，在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker 也可能會下降。

對大部分細胞消化來說，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部分胰酶，然后直接加新鮮的培養基將細胞吹打下來，省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低，所以不會對細胞產生任何影響。
對于難消化的細胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS洗滌一次后，加入稍微多一點胰酶，置37ºC徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落（一晃細胞就掉下來），然后再加含血清的培養基終止胰酶反應、離心 (若是無血清培養基，需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是，細胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數，而吹打次數越多，細胞活性越差。
 

培養瓶的選擇
一般，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞，用玻璃瓶培養的效果會更好。因此，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復蘇時或者原代培養），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。
 

細胞嬌弱，想要成功地養好細胞，需要時刻惦記它，及時觀察，出現意外，及時處理，才能收獲一盤漂亮的細胞。若仍有疑問，建議回顧往期文章或聯系我們

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