間充質干細胞MSC誘導分化與染色實用指南
間充質干細胞（MSC）具有多向分化的潛能，在體外一定條件下可以誘導分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞。
BI NutriStem® MSC系列擁有眾多明星產品，除了NutriStem® MSC無血清培養基，也提供MSC誘導分化試劑—MSCgoTM XF Differentiation Kits。
為何選擇MSCgoTM XF Differentiation Kits ？
不含血清，無異源，
促進多種來源hMSC分化為
成骨、成脂細胞、成軟骨細胞
分化效果更加明顯
成骨分化可短至7天。
成脂分化 成骨分化 成軟骨分化
如何做好干細胞誘導分化？
（注意：若使用其他培養器皿，請適當調整體積。)
2. 置于37°C，5% CO2培養箱中培養。
3. 分化：培養24h后即細胞融合度達到80%時，將MSC NutriStem® XF 培養基吸除，每孔加入0.5ml分化培養基。
（注意：若細胞融合度<80%，繼續再培養一天。）
4. 置于37°C，5% CO2培養箱中培養10-21天，每2-3天換液。
（注意：培養時間越長，越容易礦化，ARS染色更明顯。）
5. 成骨評價：使用2%的ARS染色液。
接種hMSC
1. 用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀釋) 預包被24孔盤，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接種6x104 細胞 (3x104 cells/cm2)。注意：若使用其他培養器皿，請適當調整體積。
2. 置于37°C，5% CO2培養箱中培養。
分化
1. 培養24h后即細胞融合度達到80-90%時，將MSC NutriStem® XF 培養基吸除，每孔加入0.5ml分化培養基。
注意：若細胞融合度<80%，繼續再培養一天。
2. 置于37°C，5%CO2 培養箱中培養14-21天，參照以下建議的替代培養基。
根據hMSC類型的替代培養基方法
不同來源的hMSC具有不同的多向分化潛能。例如，hMSC-AT需要較短的誘導期(~ 6天)，而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天誘導期。
注意：對于所有不同類型的hMSC，誘導成脂后建議使用維持培養基。避免將液體直接加入到脂肪細胞上，需要非常小心移液，因為脂肪細胞是脆弱的。
hMSC-AT:
1. 一個分化周期/維持培養基6-8天使用完全成脂分化培養基，建議每3-4天換液。
2. 成脂誘導完成后，用維持培養基MSC NutriStem® XF(05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培養基，培養3-4天。
hMSC-BM:
1. 一個分化周期/維持培養基8-12天使用完全成脂分化培養基，建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導完成后，用維持培養基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培養基，培養3-4天。
hMSC-CT:
1. 至少兩個分化周期/維持培養基5-10天使用完全成脂分化培養基，建議每3-4天換液(0.5 ml/well)。
2. 成脂誘導完成后，用維持培養基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1)替代分化培養基，培養3-6天，每2-4天換液。
3. 重復培養周期直到觀測到成熟脂肪細胞（即脂滴的形成）。
1. 接種hMSC，3D培養在 96-well U-bottom培養板中每孔加入100μl MSC NutriStem® XF，接種1x105細胞 (30-40x104 cells/cm2)。無需預包被。
注意：微量培養技術也是一個選擇并且可以激發球形細胞的形成：接種10μl 1x104cells/ml 入板的中心（最終1x105cells/well），使其貼壁2小時，然后加入培養基0.1ml/well。
2. 置于37°C，5% CO2培養箱中培養。在24-48小時內會自發形成球狀體。
3. 分化：培養24小時后，將MSC NutriStem® XF培養基吸除，每孔加入0.2ml分化培養基。
4. 置于37°C，5% CO2培養箱中培養14-21天。
注意：培養時間長，將得到更成熟的軟骨細胞（Alcian Blue染色強度更大）。
5. 每3-4天更換分化培養基（0.2ml/well）。
注意：小心不要吸入球狀體。
ViVaCell提供專為干細胞分化而設計
間充質干細胞分化染色試劑
（MSC Differentiation Staining Kits）
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MSC成骨分化染色試劑盒 MSC成脂分化染色試劑盒 MSC成軟骨分化染色試劑盒
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