細胞形態異常，魚骨圖來幫忙（五）

瀏覽次數：2434　發布日期：2019-10-31　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

細胞培養過程中
細胞輔助試劑是不可或缺的角色
那么它是怎么影響細胞形態的呢？
BI中國市場部帶您分析分析~
細胞輔助試劑可分為以下四部分：

接下來我們逐條分析！
（點擊圖片，可查看詳細魚骨圖鏈接）

胰酶

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什么情況下是胰酶可能出現了問題呢？
一旦發生消化時間逐漸拉長，或是細胞消化不下來，需注意胰酶是否已經失活。由于胰酶為蛋白類產品，反復凍融容易影響其活性。
品質不佳的胰酶也容易帶入支原體或動物源性污染源，BI所生產的胰酶經過輻射照射處理，確保品質及有效杜絕支原體的引入。
臨床培養可選用重組胰酶，以避免引入未知動物源病原體。

解決方案：

一般胰酶保存方式，建議15或50ml分裝后-20℃凍存，使用前必須37℃水浴或培養箱回溫，胰酶消化后使用不含鈣鎂的緩沖液清洗細胞，以稀釋殘余的胰酶。

若使用無血清培養基培養時（血清中含有胰酶抑制蛋白），使用胰酶消化后可使用胰酶抑制劑終止殘存胰酶反應。

Biological Industries（BI）可提供：
（點擊產品貨號，可查看產品鏈接）

產品名稱	貨號
Trypsin Solution B（0.25%）, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red 胰蛋白酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，不含EDTA）	03-046-1A/B
Trypsin Solution B（0.25%）,10X Conc, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red 胰蛋白酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，10X濃縮液）	03-046-5B
Crystalline Trypsin Solution（0.02%）, without Phenol Red 水晶胰酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，不含EDTA）	03-047-1A/B
Trypsin EDTA Solution A（0.25%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.25%，EDTA 0.02%）	03-050-1A/B
Trypsin EDTA（0.5%）, EDTA（0.2%）,10X Conc, without Phenol Red 胰酶（不含酚紅，10X濃縮液）	03-051-5B
Trypsin EDTA Solution B（0.25%）,EDTA（0.05%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.25%，EDTA0.05%）	03-052-1A/B
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.05%，EDTA 0.02%）	03-053-1A/B
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, without Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.05%，EDTA 0.02%，無酚紅）	03-054-1A/B
Soybean Trypsin Inhibitor 50X Conc., 5mg/ml 大豆胰蛋白酶抑制劑	03-048-1C

緩沖液

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細胞在胰酶消化傳代之前，應使用PBS洗滌殘留的完全培養基（完全培養基中的血清含有胰酶抑制蛋白），如果是對于一些更難消化的細胞，則必須使用不含Ca²⁺，Mg²⁺離子的PBS，因為這些離子也會抑制酶的活性。

解決方案：

Biological Industries（BI）可提供：
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產品名稱	貨號
Hanks' Balanced Salt Solution，With Calcium and Magnesium With Phenol Red HBSS平衡鹽溶液（含鈣，鎂和酚紅）	02-015-1ACS
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), without Calcium and Magnesium DPBS緩沖液	02-023-1ACS
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), 10X Conc., without Calcium and Magnesium DPBS緩沖液（10X濃縮液）	02-023-5ACS
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium PBS緩沖液	02-024-1ACS
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium，10X Conc. PBS緩沖液（10X濃縮液）	02-024-5ACS

應從正規供應商處購買，以確保品質，如滲透壓、無菌等。

凍存液

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凍存液中的抗凍劑對細胞多少具有毒性，所以細胞解凍復蘇時，不宜在冷凍管內懸浮太久，需在解凍復蘇后盡快轉移到完全培養基中，并在隔天置換掉含有抗凍劑的培養基。

細胞的狀態不佳，可提高培養基內血清的比率，隔天就更換培養基，以置換掉含有DMSO的培養基。也有可能有些細胞本身冷凍后存活率不佳或冷凍時的細胞數較少。

如以上都有注意到，但復蘇率仍然不佳，就必須考慮是否為凍存操作步驟出了問題，是否程序降溫、或凍存前細胞狀態已不佳（存活率低）。

（詳細凍存手法可戳此處）

解決方案：
建議選取指數增長時期的細胞凍存，此時細胞狀態較佳。
Biological Industries（BI）可提供：
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中文名稱	貨號
無血清細胞凍存液	05-065-1
無血清間充質干細胞凍存液	05-712-1
無血清干細胞凍存液	05-710-1
D10無血清凍存液	05-713-1

抗生素

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細胞在體內是無菌生長狀態，所以抗生素對細胞會有一定程度的影響。
已知某些抗生素對細胞的不同影響，如：
1. β-內酰胺類抗生素（青霉素）--會影響蛋白質合成，抑制細胞生長增殖；
2. 氨基糖苷類/氨基糖類（鏈霉素，卡那霉素，慶大霉素）--會減少蛋白質合成，ATP水平降低，產生細胞毒性；
3. 內酯類（兩性霉素B/fungizone, 制霉菌素）--干擾細胞膜，產生細胞毒性；
所以一般常規細胞培養，請盡量降低抗生素使用率，避免上述影響及細菌抗藥性產生。

解決方案：

Biological Industries（BI）可提供：
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中文名稱	貨號
兩性霉素B 250mg/ml	03-028-1B
兩性霉素B 2500mg/ml	03-029-1B
制真霉素	03-030-1C
青鏈雙抗	03-031-1B
青鏈雙抗，10X濃縮	03-031-5B
青鏈霉素+制真霉素三抗	03-032-1B
青鏈霉素+兩性霉素B 三抗	03-033-1B
青鏈霉素+新霉素三抗	03-034-1B
硫酸慶大霉素溶液	03-035-1B
卡那霉素溶液	03-049-1B