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預防細胞培育基污染的四大方法

瀏覽次數:1413 發布日期:2021-7-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。細胞培育基受各種霉菌、細菌和支原體污染后,一般都較難掃除或殺滅,其間以支原體更難掃除,因此從預防著眼為上。那細胞培育基預防污染的四大方法如下:

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環素衍生物)抑制支原體。
1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃備用。
2.處理:取受支原體污染的細胞,吸除培育液,參加含BM-1的1640培育液培育3天后,吸除培育液,再參加含BM-2的1640培育液培育4天,如此連續三個輪回。
3.檢測:用33258熒光染色鏡檢(每個輪回末應檢測一次)。
4.培育:鏟除支原體后的細胞,在不加上述抗生素的培育基液中,再傳代培育3~4次。
5.鏡檢:如鏟除不完全可再進行處理至純潔停止(一般3個輪回即能被完全消除),即先用含BIP培育液培育12天后,再按上述方法處理。

二、加溫除菌法
把受污染的細胞置41℃中作用5~10小時。

三、動物體內接種除菌法
把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中,借動物免疫系統消除支原體,而腫瘤細胞卻能在體內持續成長,待一定時間后,從體內取出細胞培育基再進行培育繁衍。

四、巨噬細胞吞噬法
從動物腹腔采取巨噬細胞,為掃除其它細胞成分,可先進行純化,然后再參加被支原體污染的細胞培育液中混合培育。在培育過程中,為查看支原體是否已被消除潔凈,可利用支持物培育法驗證,取出支持物逐日染色、鏡檢調查,至支原體已被消除潔凈停止。
來源:上海博湖生物科技有限公司
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