流式實(shí)驗(yàn)無(wú)染色/弱染色常見(jiàn)原因及實(shí)用對(duì)策：
1.抗體貯存和操作不當(dāng)
抗體應(yīng)保存在2-8℃中，避光保存，同時(shí)避免反復(fù)凍融
2.熒光染料淬滅
熒光抗體和熒光抗體染色后的樣本都應(yīng)該避光保存
3.自發(fā)熒光較高
改變抗體的熒光染料形式，避開(kāi)與自發(fā)熒光相同發(fā)射光的染料
4.染色時(shí)間和溫度不正確
適當(dāng)調(diào)整染色時(shí)間和溫度
5.使用錯(cuò)誤的染色液染色細(xì)胞內(nèi)蛋白
為了獲得最佳細(xì)胞內(nèi)蛋白染色，應(yīng)該使用正確的緩沖液系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞固定并破膜，以檢測(cè)胞漿和細(xì)胞核蛋白
6.分泌性胞內(nèi)蛋白
流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞因子、趨化因子和生長(zhǎng)因子等分泌性蛋白必須保留在細(xì)胞內(nèi)
7.蛋白質(zhì)下調(diào)，內(nèi)化或從細(xì)胞中被剪切
確定使用的刺激條件不會(huì)影響蛋白質(zhì)定位
8.蛋白的表達(dá)水平過(guò)低
對(duì)于表達(dá)水平過(guò)低的抗原，染色時(shí)使用最亮的熒光染料，兩步法染色有時(shí)可以提高敏感性，例如先使用生物素化抗體，再使用熒光結(jié)合二級(jí)抗體染色
9.細(xì)胞的分離方案或冷凍貯藏破壞抗原
從固態(tài)組織或細(xì)胞培養(yǎng)皿中收集細(xì)胞使用的酶會(huì)破壞細(xì)胞表面蛋白質(zhì)，嘗試用非酶的試劑制備細(xì)胞。檢測(cè)制備細(xì)胞的試劑和細(xì)胞的貯藏/處理，是否可能影響抗原
10.激光器性能異常
使用流式細(xì)胞儀設(shè)定&跟蹤（CS&T）微球，以檢查激光的校準(zhǔn)和功能
11.使用的濾片不正確
檢查所用熒光染料的激發(fā)波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)，確保使用正確的激光和濾片收集數(shù)據(jù)
12.數(shù)據(jù)過(guò)度補(bǔ)償
利用單染色對(duì)照和熒光減一（FMO）對(duì)照為每次實(shí)驗(yàn)設(shè)定補(bǔ)償
13.細(xì)胞群的設(shè)門(mén)不正確
確保對(duì)細(xì)胞群的正確設(shè)門(mén)，使用活性染料并對(duì)單細(xì)胞群設(shè)門(mén)，可大幅度減少假陽(yáng)性
14.數(shù)據(jù)分析不正確
為最佳顯示稀有細(xì)胞或染色暗淡的細(xì)胞，利用雙參數(shù)圖觀察細(xì)胞