在本應(yīng)用介紹中，我們將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞（Rat1）的單個實驗案例。然后，我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細(xì)胞骨架，并用DAPI對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。

該實驗包括四個主要步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)，固定,滲透和封閉，染色，成像

• 在無菌條件下打開μ-Slide I ibiTreat（80106）并將其放在μ-Slide架（80003）上。將100μl 3×10 5 細(xì)胞/ ml Rat1細(xì)胞懸浮液加入通道中。如下圖所示直接加入通道。

• 用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器。不要完全關(guān)閉它們。

• 將架子放入培養(yǎng)箱（37°C; 5％CO2）中，讓細(xì)胞附著（60分鐘）。然后用0.5ml無細(xì)胞培養(yǎng)基填充兩個儲庫。

• 培養(yǎng)過夜。
   

固定滲透和封閉:

• 通過使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養(yǎng)基。用Dulbecco's PBS洗滌細(xì)胞，緩慢地將1ml液體施加到一個空的儲液器中，并從對面的儲液器中吸出。

• 使用大約200μl的3.7％paraformaldehyde固定細(xì)胞20分鐘。從通道的另一側(cè)移除儲液器的液體

• 如步驟5中所述，用1ml PBS再次洗滌細(xì)胞。

• 使用200μl0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分鐘。

• 施加200μl1％BSA 溶液封閉20分鐘。

• 用PBS洗滌細(xì)胞。

染色：

• 從通道中清除所有液體，吸出液體后，不要讓通道干燥。

• 用100μlAlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA，InvitrogenCorp.）在室溫下培養(yǎng)20分鐘。

• 用PBS洗滌細(xì)胞并吸出通道液體。

• 用100μlDAPI（0.1μg/ ml，Sigma-Aldrich）培養(yǎng)3-5分鐘。

• 用PBS洗滌細(xì)胞并吸出所有液體。用滴管瓶注入100μl Ibidi安裝介質(zhì)。用提供的蓋子蓋住儲液器。μ-Slide可以存儲大約4周。

成像：

• 在熒光顯微鏡下選擇適當(dāng)?shù)臑V鏡，也可以使用浸油觀察細(xì)胞。

Rat1細(xì)胞;

綠色：F-肌動蛋白細(xì)胞骨架; 藍(lán)色：核

（Zeiss Axiovert 135；Plan-NefLoar 100x／1.3）

我的實驗應(yīng)該使用哪種載玻片？

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