牛口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒檢測原理與方法
瀏覽次數:988 發布日期:2021-10-18
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檢測原理:
如果待檢樣品中含有口蹄疫病毒O型抗體,就會與包被板上的口蹄疫病毒O型重組抗原及第二步加入的抗牛二抗酶標結合物特異性結合。間接結合在包被板上的抗牛二抗酶標結合物與底物反應的顯色狀況即可反映出樣品中是否含有保護水平的口蹄疫病毒O型抗體。
樣品要求:
1. 本試劑僅適用于檢測牛血清或血漿。
2. 為取得最佳實驗效果,避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴重溶血的樣品;
3. 短期(3天內)將進行檢測的血清樣品可存放于2~8℃;如需長期保存,應置于-20℃以下,避免反復凍融。
檢測方法:
1. 洗滌液配制:用蒸餾水或去離子水將洗滌液10×(2號液)按1:10稀釋(例如,取100mL洗滌液10×,加900mL蒸餾水或去離子水混合),充分混勻即為工作濃度洗滌液。
2. 樣品稀釋及加樣:用樣品稀釋液(5號液)將待檢血清按1:100稀釋(如5μL血清+495μL樣品稀釋液),在樣品孔每孔僅加入已稀釋的待檢樣品100μL;如果采用血清稀釋板稀釋樣品,其使用方法詳見說明書背面。
3. 加對照品:陰性、陽性對照品不用稀釋,直接加樣。 陰性對照2孔,每孔僅加入100μL陰性對照品;陽性對照2孔,每孔僅加入100μL陽性對照品。蓋好封板膜,37℃避光
反應30分鐘。
4. 洗板:甩去孔內液體,每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次,每次均需停留1分鐘;最后一次甩凈,拍干。
5. 加酶反應:每孔加酶標結合物(1號液)50μL,蓋好封板膜,37℃避光反應30分鐘。甩去孔內液體,如上洗板,拍干。
6. 顯色反應:按所需用量,臨用前取等體積底物液(3號液)和顯色液(4號液)充分混勻,每孔加100μL,蓋好封板膜,37℃避光反應10分鐘。
7. 終止反應: 加終止液(6號液)50μL,用酶標儀雙波長(450nm作為主波長,630nm作為參比波長)讀取OD值。