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Nucleofection核轉處理步驟及提高電轉染效率的小技巧

瀏覽次數:2535 發布日期:2021-11-18  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

01

Nucleofection™核轉的處理 – 

簡單的操作方案

 

步驟一:


獲取目標細胞

 

步驟二:

混合和結合


轉移至Lonza認證的電轉杯或電轉板條中

 

步驟三:

選擇Nucleofector™程序,放入電轉耗材,按下開始按鈕

 

步驟四:

用培養基將電轉耗材的細胞轉移出來

 

步驟五:

轉移至培養皿中。Nucleofection™電轉后3-8小時即可檢驗
 

02

提高Nucleofection™核轉效率

 

小技巧:

1.準備好加了新鮮培養基的多孔板,并在實驗前于37°C下預平衡。

2.使用傳代次數少并具有推薦融合度或密度(對數生長)的細胞。

3.限制胰蛋白酶暴露時間,仔細監測細胞分離情況。

4.根據優化方案進行細胞計數并使用適量細胞數;所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加。

5.采用高質量DNA,使用內毒素去除試劑盒進行純化;請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度。

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規定的時間進行離心。

7.離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液,避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸。

8.Nucleofection™核轉后,用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養基。

輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉耗材底部,收集細胞

•將細胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

•請勿重復抽吸混合細胞

發布者:上海瑋馳儀器有限公司
聯系電話:18521301252
E-mail:xiaojing.su@weichilab.com

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