RT-PCR就是逆轉錄 PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行 DNA擴增。

RT-PCR需注意的細節

1. 實驗過程中必須戴口罩、手套，盡量避免其他人員干擾。

2. RT試劑盒從冰箱拿出，應該充分解凍，瞬離后，混勻，放于冰上，可在冰上加樣。試劑可以用數字貼紙編號，避免漏加、錯加試劑。

3. 取用不同的試劑時，必須更換槍頭，樣本之間要避免交叉污染。

4. 逆轉錄時，PCR儀可以先預熱。

5. 反應體系配好之后，應充分混勻，瞬離，并且彈去管內的氣泡。

6. 實驗過程中應預防RNA酶污染，使用無酶槍頭以及EP管，同時臺面可以使用固相RNA酶去除劑清潔。

7. PCR時，管壁盡量避免寫字。

8. 管蓋一定要蓋嚴。

9. 10μL逆轉錄反應體系建議加入不超過500ng的RNA。

10. 如果目的基因表達量非常低,最多加入1μg Total RNA,否則加入RNA量過高,可能會超出后續PCR的線性范圍。

11. 反應體積可根據需要等比例放大。

12. 試劑盡量不要反復凍融。

13. 每個樣品至少3個平行孔,所有成分加完后，離心去除氣泡。

14. 可將所有共同物質加入同一管中，混勻后分散入其他管中。