15女上课自慰被男同桌看到了,亚洲国产精品久久久久久久,大雞巴亂倫有声小说,国产精品成人一区二区三区

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 解析細(xì)胞裂解的主要方法

解析細(xì)胞裂解的主要方法

瀏覽次數(shù):275 發(fā)布日期:2022-3-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
裂解方法包括化學(xué)裂解、酶裂解和機(jī)械裂解。化學(xué)裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會(huì)很少使DNA 斷裂。這兩種方法(包括SDS 和溶菌酶處理等)提取純化DNA中常用的方法。機(jī)械裂解可以更均一的裂解細(xì)胞,同化學(xué)裂解相比,機(jī)械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機(jī)械處理可以更劇烈和全面的裂解細(xì)胞,但也會(huì)造成DNA 的斷裂。

一、機(jī)械裂解法主要有以下兩種:
1、熱休克(Thermal shock),既反復(fù)凍溶法,是一種常用的機(jī)械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezing and thawing),。
原理:由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。冷凍通常在液氮或-20°C冰上進(jìn)行,解凍可以在37、50、65 或100℃水浴中進(jìn)熱休克比化學(xué)裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細(xì)胞裂解率。

2、超聲波處理(Ultrasonication)既利用超聲加熱的方法,把細(xì)胞破碎。但這種處理會(huì)導(dǎo)致DNA 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設(shè)定好超聲時(shí)間和間隙時(shí)間,一般超聲時(shí)間不超過5秒,間隙時(shí)間最好大于超聲時(shí)間,這些都有利于保護(hù)酶的活性。bead-beating 也是常用的機(jī)械處理方式,有報(bào)道指出bead-beating 比熱休克和化學(xué)裂解的細(xì)胞裂解效果更好 雖然DNA產(chǎn)量較高,但通常得到的DNA片段較小。

二、 化學(xué)裂解和酶裂解法(在提核酸時(shí)聯(lián)合使用)
主要是裂解液處理法,細(xì)胞裂解液的主要目的有以下幾種:
(1)利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層,破裂細(xì)胞;
(2)溶解蛋白;
(3)蛋白變性使其穩(wěn)定;
(4)抑制蛋白酶活性。

主要根據(jù)不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNA或DNA時(shí),我們主要是要充分裂解細(xì)胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據(jù)蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液,在提取蛋白后,再根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要復(fù)性蛋白等。以下是細(xì)胞裂解中常用試劑和其作用:
50 mM Tris-HCl pH 7.4(緩沖體系),150 mM NaCl(等滲體系),1 mM PMSF (強(qiáng)大的蛋白酶抑制劑),1 mM EDTA(變性劑和穩(wěn)定劑),5 µg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制劑),5 µg/ml Leupeptin(蛋白酶抑制劑),1% Triton x-100(破壞細(xì)胞),1% Sodium deoxycholate(中度變性劑和蛋白溶解劑),0.1% SDS(強(qiáng)變性劑和蛋白溶解劑)。7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶K等。
發(fā)布者:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司銷售部
聯(lián)系電話:021-52960951
E-mail:3004972055@qq.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 女性| 双辽市| 辉南县| 安远县| 新巴尔虎右旗| 临清市| 加查县| 丰顺县| 玉田县| 潮安县| 夹江县| 怀化市| 安化县| 贵定县| 黄平县| 沅陵县| 来安县| 万载县| 铅山县| 铜山县| 林口县| 河源市| 靖江市| 夏河县| 贡觉县| 隆回县| 沭阳县| 班戈县| 蒙城县| 呼伦贝尔市| 平乡县| 日土县| 林甸县| 资阳市| 夏邑县| 交城县| 民勤县| 偃师市| 察哈| 衡山县| 天祝|