一篇文章幫您解決培養巨噬細胞所有的煩惱~
 

細胞 · 介紹

►   單核細胞及由單核細胞演變而來的具有吞噬功能的巨噬細胞，稱為單核吞噬細胞系統。單核細胞發生于骨髓的多能干細胞，循環于血液中，穿透血管內皮進入組織內，轉變為巨噬細胞。單核吞噬細胞系統在體內分布廣，細胞數量多，主要分布于疏松結締組織、肝、脾、淋巴結、骨髓、腦、肺以及腹膜等處，并依其所在組織的不同而有不同的名稱。

►   單核吞噬細胞系統的細胞有很強的吞噬能力，能吞噬異物、細菌、衰老和突變的細胞等。此外，也吞噬抗原抗體復合物，并參與脂質與膽固醇代謝，可吞噬和蓄積脂質。吞噬的生理意義在于消除體內不需要的物質，其中巨噬細胞與淋巴細胞、粒細胞、肥大細胞，在功能上，有互相促進和互相抑制的作用。當單核吞噬細胞系的生理功能失調時，可引起多種疾病。

►   因此，巨噬細胞常被用來做相關研究。RAW 264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；在正常培養中，細胞會出現多邊形和不規則形狀，并伴有許多偽足的生成，細胞貼壁能力超強。RAW 264.7細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。

RAW 264.7
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

►►► 正常細胞形態：

剛接種半小時左右剛貼壁時細胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于培養皿中培養一段時間后一小片一小片的生長，片片不相連。

►►► 異常細胞形態：

特點：

RAW264.7細胞極其容易出現偽足（長角）。需要及時觀察細胞，若出現偽足則提示該傳代了（可能是一天一傳）。

當出現少量的偽足可正常傳代，有少數分化的細胞是正常的，很難保證可以完全不分化。

分化的細胞：呈多角形，明顯的體積變大，時常有較長的觸角。

►►► 培養的煩惱與解決：

1►胰酶消化刺激RAW 264.7細胞嚴重分化

分化的RAW 264.7細胞

被胰酶消化過的RAW 264.7細胞表現出明顯的分化現象呈多角形，有較長觸角。

解決辦法：刮取是比較合適的方法。把細胞培養液倒掉，加入37℃預溫的PBS，然后刮細胞，食指和拇指夾緊細胞刮，細胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來回刮和反復刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。

2►血清批間差刺激RAW 264.7細胞嚴重聚團

更換血清批次后嚴重聚團的RAW 264.7

原因推斷：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細胞本身有聚團生長特性，但嚴重聚團可能受到血清里的某些因子刺激。

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。

3►有分化的細胞說明細胞狀態不好嗎？

個別分化的RAW 264.7細胞

培養時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細胞生長速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時間間隔超過3天很難吹下，每一次接種密度都要控制好。

解決辦法：推薦傳代比例為1:3-1:6；推薦傳代時間：2-3天；推薦傳代融合率：80%-90%。

►►► 以下為培養不錯的RAW 264.7細胞形態

RAW 264.7細胞

生長良好的RAW264.7 胞體邊界感清晰，各個喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時刻準備著為人類生命科學研究而“獻身”。

►►► 聽說熱滅活的血清適合培養巨噬細胞？

最后為大家普及一條知識~

熱滅活可以滅活補體系統。啟動的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學研究中，培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

熱滅活時請將血清置于 56℃水浴30分鐘。最好另加一個盛放與血清等體積水的燒杯并將溫度計插入水中，以水中溫度56℃為計時開始時間，加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清。

實驗顯示，對大多數的細胞而言，不需要使用熱滅活血清。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進或完全沒有作用，造成細胞生長速率降低。同時沉淀物會顯著地增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察呈小黑點或絮狀物，影響細胞觀察。若非必須，不需要做熱滅活處理。

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