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HK-2細胞培養技巧

瀏覽次數:1420 發布日期:2022-12-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK-2,取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮,通過轉入HPV-16 E6/E7基因構建而成,并在無血清培養基中持續生長了一年多。HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF,保留了良好的PTCs的表型。

陽性表達:堿性磷酸酶;γ-谷氨酰轉肽酶;亮氨酸氨肽酶;酸性磷酸酶;細胞角蛋白;α3β1 整合素;纖連蛋白。

陰性表達:因子VIII 相關抗原、6.19 抗原和 CALLA 內肽酶呈陰性。

在培養HK-2細胞的時候,常會出現一些細節問題,不可掉以輕心。以下是小海星為大家準備培養HK-2細胞常見的問題,以及解決方案。

1. 出現拉絲
細胞伸出細長的絲有兩種情況:
第一種情況是細胞遷移造成的,細胞在培養皿上并不是靜態的,也會出現遷移。遷移時細胞的一部分滯留在原處,遷移的過程中會拉出一條細長的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數,細胞整體的生長狀態是正常的,不用特殊處理。

第二種情況是營養不良,拉絲的細胞占大多數,同時細胞生長緩慢,此時可以提高血清比例(不超過20%)或添加5 ng/mL EGF。

2. 形態不對
正常的HK-2呈鋪路石狀生長,如果細胞呈鐮刀狀或不規則狀(如下圖),可能是因為培養環境發生了較大的改變,比如從有血清到無血清的轉換,此時換回原來的培養條件細胞可逐漸恢復;如果細胞變得細長,這時候可能是營養不良。
3. 出現空泡
空泡問題需要結合生長速度和形態來看:如果生長速度和形態正常,空泡可能是正常的細胞活動,傳代后空泡即可減輕。

如果生長較慢,形態異常,空泡可能是自噬行為,可加大血清比例(不超過20%)或更換血清品牌改善細胞狀態。
4. 生長緩慢
在標準培養條件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3傳代條件下,HK-2的傳代周期約為3天。
當細胞生長緩慢,一周無法傳代時,需要考慮培養基特別是血清是否合適。選擇合適的培養基及血清,同時加大細胞接種密度可以改善。


培養基選擇:
HK-2最初建系使用無血清培養,眾多文獻以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下,HK-2也能良好生長。但胎牛血清的質量是關鍵,胎牛血清品質越高,HK-2狀態越好。若使用無血清培養基培養,需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養瓶,以促使貼壁。

來源:蘇州海星生物科技有限公司
聯系電話:4009906627
E-mail:hfx@dingbio.com

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