全能核酸酶使用技巧及典型應用
瀏覽次數:903 發(fā)布日期:2022-12-29
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這一篇,我們?yōu)榇蠹規(guī)砀钊氲暮怂崦甘褂眉记桑『痛蠹乙黄鹛接懭绾卧趯嶋H使用中更好地調整我們的實驗方法,讓核酸酶發(fā)揮最大的作用!本篇主要在尿素變性條件使用、低溫環(huán)境以及核酸酶滅活與去除等幾個問題上做出解答。
典型應用:
新冠滅活疫苗生產過程中宿主DNA的去除
傳統疫苗工藝純化過程中去除宿主核酸
細胞或基因治療病毒載體制備流程宿主核酸的去除
重組蛋白純化或組織細胞樣品蛋白提取時去除核酸污染
與細胞或細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白產量
減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象)
讓我們來看看Pannarse全能核酸酶在使用上更深入的一些小介紹吧!
1. 當蛋白溶解性差需要變性,變性環(huán)境對核酸酶有影響嗎?
常見的變性條件下一般會使用高濃度尿素。Pannarase核酸酶在尿素濃度6M時,隨著時間延長活性會逐漸減少。在7M尿素濃度下,核酸酶15min后出現變性失活,但在酶失活前多數核酸已降解,可通過提高核酸酶濃度補償高濃度尿素影響。
2. 當反應溫度低于37℃時,如何保證核酸酶消化效果?
體系固定的情況下,核酸酶消化效果取決于酶用量、反應溫度和反應時間。當反應溫度較低時,為避免過多的核酸酶引起的殘留問題,更加推薦延長反應時間來保證消化效果。
怎樣滅活Pannarase核酸酶?如何去除?
采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制核酸酶活性,極端條件會造成不可逆失活,例如100mM NaOH,70℃處理30min等。核酸酶可采用陰離子交換柱從目的產物中分離出去。
關于常用反應液和減少用量 ,你應該知道~~
常用生物緩沖液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。如需減少用量,可酌情提高反應溫度或延長時間。
以上是我們關于核酸酶使用的更深一步的技巧介紹,后續(xù)我們會持續(xù)更新為您的實驗提供更多參考,敬請關注!
相關產品信息:
Pannarase全能核酸酶五大特點:
1. 杰出的比酶活,更高效的核酸降解能力
2. 規(guī)范的液相標準品定量,出色的質譜均一性認證
3. 嚴格的質控標準,確保單位酶活的準確性以及批次間穩(wěn)定性
4. 無動物源性物料
5. 先進的生產工藝,非傳統His標簽純化,排除引入金屬離子風險