冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常 ( 例如產生單株抗體或是其它蛋白質 ) 。

步驟：

1 .操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。

2 .自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。

3 .將新鮮培養基置于 37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以 70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。

4 .取出冷凍管，立即放入 37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內全部融化，以 70 % ethanol 擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。

5 .取出 0.9 ml 解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器內 ( 稀釋比例為 1:10 ～ 1:15) ，混合均勻，放入 CO2 培養箱培養。另取 0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。

6 .解凍后是否立即去除冷凍保護劑 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ，依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5-10 ml 培養基之離心管內，離心 1,000 rpm, 5 分鐘，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入 CO2 培養箱培養。

7 .若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養后隔日更換培養基。