RAW 264.7細胞培養指南詳解
瀏覽次數:1196 發布日期:2023-6-12
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細胞介紹
每一種細胞都有自己的“脾氣”,RAW 264.7更是如此,要想養好它,首先我們得充分了解它,比如生長特點、細胞形態、培養體系等,在這基礎上,養好它自然也是“
水到渠成”。
英文名稱:RAW 264.7
中文名稱:小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
種屬:鼠源
組織來源:Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;單核細胞;巨噬細胞。
生長特性:
貼壁生長(胰酶會刺激分化)
細胞形態:不規則性(
圓形和梭形為主)
傳代比例:1:2-1:3
換液頻率:2-3次/周
培養體系:DMEM(高糖)+10%特級胎牛血清(逍鵬C04001)+1%P/S
培養條件:5% CO
2 ;37℃
RAW 264.7生長圖片
RAW 264.7 細胞正確傳代方法
RAW264.7細胞具有
強吞噬能力,細胞在吞噬抗原后釋放趨化因子,促使細胞分化出偽足,
因此造成細胞難消化。RAW 264.7在傳代過程中,不需要使用酶進行消化,酶消化會加速細胞的分化,F在比較常見的是吹打傳代,此方法易于操作,也能很好地控制細胞的分化。
傳代的步驟
第一步:用移液管將培養基中的培養液吸干凈。
第二步:用 PBS 將細胞層清洗1至2遍。
第三步:用移液管吸取新鮮的培養基輕輕將細胞吹打下來,并將細胞吹打成單細胞懸液,注意吹打的力度,避免過重或者過輕。
第四步:將吹打好的單細胞懸液進行分裝接種。
注意事項
- 根據逍鵬的經驗,RAW264.7三天就可能分化,吹下的難度也大大增加,通過及時傳代將RAW264.7的分化比例控制在合理的范圍內,
- 該細胞不建議使用胰酶消化,胰酶會刺激分化,超過3天不傳代細胞容易分化。培養時,存在少量分化細胞,屬于正,F象。
- 推薦使用吹打傳代,可以有效控制細胞分化。
- 當細胞的密度達到80%-90%的時候,最容易吹下;密度較低,不太好吹下來。
- 接種的密度需要控制好,推薦進行高比例的傳代。
- 推薦使用高質量的胎牛血清,血清的質量差異會導致貼壁能力的變化。
- 隨著培養時間的增加,細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。當細胞的密度增加到一個“臨界點”的時候,會有細胞散落到培養基中,此時懸浮和貼壁的細胞會同時出現在視野中 。
- 由于堆積生長,有些細胞脫落漂浮,在傳代時應收集起來,離心后細胞沉淀可以繼續培養。
- 切勿強制吹下所有的細胞,貼壁較牢或已分化的細胞可丟棄,就只需接種較容易吹打下來的未分化的細胞即可。