脯氨酸（PRO）含量測定試劑盒實驗微量法測定指南
測定意義：
Pro廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，逆境條件下，植物體內Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標之一。
測定原理：
用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測定吸光度。
測定步驟：
(2) 待冷卻后，加入0.5mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉至試劑三中；吸取0.2mL上層溶液于微量石英比色皿或96孔板中，于520nm波長處比色，記錄吸光值A。
Pro含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.0521x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2）=192×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(µg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.02605x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2）=384×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(µg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W
3、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意：最低檢測限為1μg/mL或1μg /g鮮重 或0.01μg /mg prot
Pro廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，逆境條件下，植物體內Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標之一。
測定原理：
用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測定吸光度。
測定步驟：
- 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至520nm，蒸餾水調零。
- 樣本測定：
(2) 待冷卻后，加入0.5mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉至試劑三中；吸取0.2mL上層溶液于微量石英比色皿或96孔板中，于520nm波長處比色，記錄吸光值A。
Pro含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.0521x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2）=192×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(µg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.02605x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2）=384×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(µg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W
3、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意：最低檢測限為1μg/mL或1μg /g鮮重 或0.01μg /mg prot
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