ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。

在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過(guò)程質(zhì)量控制。

一、ELISA標(biāo)本的保存：

一般來(lái)說(shuō)，再5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4°C，標(biāo)本再冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致血清IgG聚合，是間接法的試劑本底加深，超過(guò)一周測(cè)定的需-20°C保存，凍結(jié)血清溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡，渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。測(cè)抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，以少量分裝冰存，保存血清只采集是就應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎�，抗凝不完全的�?biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽(yáng)性，建議勁量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。

二、ELISA標(biāo)本的處理：

1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如有沉淀形成，應(yīng)再次離心
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成分時(shí)，用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右，通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后任然保持2-8°C的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用，
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20°C保存，單應(yīng)避免反復(fù)凍融。