Keywords：Free fat soluble vitamins; Serum; Plasma; In Vitro Diagnostics; IVD
體外診斷（In Vitro Diagnostics, IVD）是一種醫療檢測方法，廣泛應用于各種疾病的預防、診斷、療效觀察等方面，對于提高診斷的準確性、治療的有效性等情況，具有積極的意義。它通過分析人體的體液、細胞或組織樣本，為醫生提供了寶貴的診斷信息，進而輔助制定治療計劃。為確保檢驗結果的準確性和可靠性，合適的樣本選擇至關重要！

血液類樣本作為體外診斷最主要的樣本類型之一，因其組分的不同可以做不同的項目，然而，在臨床診斷中研究者發現在一些疾病診斷中，血清（Serum）或血漿（Plasma）中的脂溶性維生素（Fat Soluble Vitamins）的含量會干擾對其他指標的判斷。因此，為了準確測定其他物質的含量或指標的變化，需將血清或血漿中的脂溶性維生素去除。

一、基本定義
脂溶性維生素(Fat Soluble Vitamins)是不溶于水而溶于脂肪及非極性有機溶劑(如苯、乙醚及氯仿等)的一類維生素，包括維生素A、維生素D、維生素E、維生素K。這類維生素一般只含有碳、氫、氧三種元素，在食物中多與脂質共存，其在機體內的吸收通常與腸道中的脂質密切相關，可隨脂質吸收進入人體并在體內儲存(主要在肝臟)，排泄率不高；攝入量過多易引起中毒現象，若攝入量過少則緩慢出現缺乏癥狀。另外，脂溶性維生素大多穩定性較強。下表為4種脂溶性維生素主要作用。

種類	作用
維生素A	1.增強視網膜感光力參與視紫紅質的合成，缺乏時視紫紅質合成減少，對弱光敏感性降低，在弱光下視物模糊，稱為夜盲癥； 2.維持上皮組織結構的完整性和功能參與糖蛋白合成，缺乏時可引起上皮干燥、增生及角化，如皮脂腺角化，出現丘疹；淚腺細胞角化，淚液分泌減少，眼部干燥，稱為眼干燥癥； 3.促進機體正常生長發育促進骨細胞的分化，維持成骨細胞及破骨細胞之間的平衡；促進蛋白質、黏多糖及類固醇的合成，缺乏時組織生長發育不良； 4.促進吞噬細胞和淋巴細胞的功能，促進細胞因子的釋放，增強機體免疫力；有效抑制氧自由基的活性，保護細胞免受傷害，具有一定的癌癥預防作用。
維生素D	1.促進鈣、磷在小腸和腎小管的吸收，維持正常穩定的血鈣和血磷濃度； 2.在甲狀旁腺素和降鈣素的協同下，促進骨鈣入血，維持血鈣和血磷的平衡； 3.促使鈣沉著于新骨形成部位，促進生長和骨骼鈣化，促進牙齒健。
維生素E	1.抗氧化作用能抑制不飽和脂肪酸的氧化，減少過氧化脂質的形成以及對機體生物膜的損害，有抗衰老、抗癌及防止動脈粥樣硬化作用； 2.維持和促進生殖功能使促性腺激素分泌增加，促進精子生成和運動，增加卵泡生長和孕酮的分泌； 3.參與多種酶活動增強微粒體中混合功能氧化酶的活性，抑制脫氧核糖核酸等分解酶系統，并對含巰基酶有保護作用； 4.其他維持毛細血管的正常通透性，增加血流量，修復血管壁損傷后的瘢痕，抑制血小板聚集，防止血栓形成；維持骨骼肌、心肌和平滑肌的正常結構和功能。
維生素K	1.可以促進肝臟合成四種凝血因子，凝血酶原、轉變加速因子，抗血友病因子，促進血液凝固； 2.可增強腸蠕動和分泌功能，延緩糖皮質激素在肝內分解，并有類似氫化可的松的作用，長期注射維生素K可增強甲狀腺的內分泌活性等； 3.可以舒張內臟平滑肌，緩解腎絞痛、膽絞痛、泌尿系出血，臨床上常用其注射劑治療血尿、尿結石、膽結石發作時，能解痙鎮痛。

由上可知，脂溶性維生素主要儲存于肝臟組織中，但在個體其余組織或體液中也均有存在，包括作為體外診斷主要樣本類型之一的血液樣本。血液樣本包含全血、血清和血漿三種類型，其中全血由血細胞和血漿組成，應用于臨床血液學檢查，如紅細胞計數、分類和形態學檢查等；血漿是血液加入抗凝劑后，經離心分離得到的液體，含有纖維蛋白原、白蛋白、球蛋白以及各種凝血因子，這些成分共同維持著血液的凝固功能；而血清則是血液在體外自然凝固或加促凝劑后分離出的淡黃色透明液體，它主要含有白蛋白、球蛋白及各種無機離子。



血清或血漿中的生理成分與機體組織間液比較接近，更能真實地反應機體的生理情況，反應其病理改變也更加靈敏。因此，在某些疾病診斷中，為避免脂溶性維生素對于特定疾病或研究的影響，合理的去除血清或血漿中的脂溶性維生素顯得尤為重要！

二、去除脂溶性維生素的方法
由上可知，在一些特殊情況下，需采用合理的方法將血清或血漿中的脂溶性維生素去除，本文以去除維生素D為例，簡要的描述4種從血清或血漿中去除維生素D的工藝，僅供參考。

工藝	方法	優缺點
有機溶劑提取法	取一定量的血漿或血清樣本，加入適量的乙酸乙酯或氯仿，震蕩，使有機溶劑與維生素D充分混合，離心即可得到不含維生素D的血漿或血清	優點：操作簡單：步驟較少，易于實施。 成本低：所需試劑和設備較為常見。 缺點：選擇性差：可能同時提取其他脂溶性物質。 溶劑殘留：可能影響后續實驗。
透析法	使用特定孔徑的透析膜，置于緩沖液中，維生素D無法通過微孔膜，遂去除	優點：溫和，不破壞樣品中的蛋白質和其他大分子； 操作簡單，無需復雜設備。 缺點：耗時長，通常需要數小時至數天； 效率低：對小分子去除效果有限。
固相萃取（SPF）法	使用C18或其它反相柱，先吸附基質中的脂溶性成分，而后用有機溶劑洗脫	優點：選擇型好，能有效分離脂溶性物質； 樣品損失少：回收率較高。 缺點：操作復雜，步驟較多，需優化條件； 成本較高，固相萃取柱價格較貴。
色譜法	使用高效液相色譜（HPLC）或氣相色譜（GC）分離并去除維生素D	優點：高分離度，能精確分離復雜樣品中的特定成分； 靈敏度高，適合微量分析。 缺點：設備昂貴，需用專業儀器； 操作復雜，需專業人員操作。
免疫吸附法	使用抗維生素D的抗體，通過免疫吸附去除基質中的維生素D	優點：特異性強，抗體能特異性結合維生素D； 高效，去除效果顯著。 缺點：成本高，抗體價格昂貴； 操作復雜，需優化實驗條件。
物理吸附法	先用水解試劑使與蛋白質結合的維生素D分離，使其游離，再利用活性炭等物理方法進行吸附去除	優點：操作簡單，成本較低，無化學污染，廣譜吸附性，可調節性強。 缺點：受環境影響較大，吸附選擇性差。

綜上所述，不同方法具有各自的優缺點，IPHASE結合實際，選用物理吸附法去除維生素D，并使用LC-MS/MS進行驗證，結果如下。圖1為IPHASE技術人員定量本司維生素D質譜檢測下限為0.5ng/ml，并以此為檢測標準，測得圖2實際產品圖譜，圖片顯示IPHASE此次分離去除維生素D的空白生物基質其VD含量小于0.5ng/ml，因此，可證明IPHASE技術人員已成功去除血清中的維生素D，該產品符合要求。