MIN6細胞培養的操作步驟及注意事項
瀏覽次數:233 發布日期:2025-3-10
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作為一種廣泛使用的胰島β細胞系,正以其獨特的優勢成為糖尿病機制研究、藥物篩選及治療開發的重要工具。今天,讓我們一起揭開MIN6細胞培養的神秘面紗。
一、胰島β細胞的理想替代
MIN6細胞是從轉基因小鼠胰島瘤中分離得到的一種永生化細胞系,保留了胰島β細胞的許多關鍵特性,包括:
胰島素分泌功能:MIN6細胞能夠響應葡萄糖刺激,分泌胰島素,是研究胰島素分泌機制的理想模型。
穩定性:作為一種永生化細胞系,MIN6細胞可以在體外長期培養,避免了原代胰島細胞壽命有限的問題。
易操作性:MIN6細胞易于傳代和凍存,適合大規模實驗和高通量篩選。
二、MIN6細胞的培養
培養基:DMEM (中喬新舟 貨號:ZQ-100)+10%FBS(中喬新舟 貨號:ZQ0500)+1%P/S(中喬新舟 貨號:CSP006)。
細胞特性:MIN-6細胞不規則、無細胞形態,貼壁性差,細胞成片狀形成小島嶼,密度高后島嶼連接形成大片,該細胞匯合度達不到100%密度。
傳代頻率: T25瓶80%匯合度,1:2傳代需要3-5天再次進行傳代。
換液頻率:2-3次/周(T25瓶7ml完全培養基)。
(中喬新舟MIN-6細胞培養圖 10X)
三、Min6培養注意的細節:
培養:細胞貼壁性不好,培養過程中會有漂浮的圓形細胞,屬于正常現象。
傳代:在消化過程中,當細胞成片脫落后,建議再室溫延長消化2min,讓團塊分散開一些。
運輸: 由于MIN-6細胞形態無規則性,貼壁性差,發貨T25瓶到貨后會出現一些不可控因素,可能會脫落,皺縮漂浮,如下到貨細胞狀態,應該怎么處理呢?下面由小編給大家匯總一下吧。
(我司客戶到貨T25復蘇瓶MIN-6細胞圖)
到貨T25細胞處理步驟:
1. 到貨發現有任何異常現象,污染、漏液、細胞漂浮等,請拍10X、 20X 各 2-3 張照片,并當天聯系我司銷售人員/區域代理或者我司技術人員。
2. 用 75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,滿瓶培養基狀態置于培養箱中靜置培養2~4h 后進行操作。
3. 2-4小時后觀察貼壁情況,若部分漂浮,需收集懸液,1200rpm/5min(約 250g 離心力)離心,收集漂浮細胞。
4. 瓶內貼壁細胞消化步驟:
l 培養基去除干凈,用PBS輕輕洗滌細胞。(T25瓶3-5ML)
l 加入0.25%胰酶-EDTA溶液,37℃消化3-5分鐘。手掌心拍打瓶尾部,顯微鏡下觀察,細胞消化成流沙狀成單個細胞脫落。
l 加入3-5ml完全培養基終止消化,輕輕吹打細胞至單細胞懸液,合并懸浮細胞。
l 按1:2的比例將細胞接種至新的培養瓶中。
5. 消化1:2傳代后第二天細胞狀態圖:
(MIN-6細胞1:2傳第二天,圖片由中喬客戶提供)
6. 培養3天后細胞狀態圖,此時可再次進行傳代分瓶。
(中喬新舟客戶提供,手機拍攝)
7.若培養過程中或實驗鋪板漂浮細胞多,可用多聚賴氨酸處理細胞培養瓶或孔板,讓細胞貼壁更牢固。
四、選擇MIN6細胞,開啟糖尿病研究的新篇章!
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