近年來,我國乳腺癌的發病率呈持續增高的趨勢,在某些發達城市,乳腺癌在女性惡性腫瘤中已位居首位,根據雌激素受體的ER的類型是呈現激素非依賴性和依賴性,研究ER對乳腺癌的發病機制,臨床治療和預后判斷,有著重要的意義。
ER是乳腺癌重要的生物學標志物,在乳腺的發育生長過程中受體內雌激素和孕激素的調控,ER是乳腺細胞中的雌激素受體,癌癥發生時,對于陽性ER的患者可以通過內分泌的治療達到70-80%的效果,而對于陰性ER患者的治療效果還不到10%,表明陰性ER患者已經完全脫離激素的調控。本研究中,主要對陰性ER乳腺癌細胞侵入淋巴細胞探究ERα對乳腺癌淋巴轉移過程中的相關關系,
實驗材料:
以MCF-7乳腺癌細胞株為實驗材料,使用基因編輯技術處理后的Cas9-ERα,基質金屬蛋白酶抑制劑MG6001處理的后的Cas9-ERα+ERα,以及 Cas9-vinculin,使用瑞典的HoloMonitor M4進行拍攝細胞的運動和遷移,觀察4小時,每2min拍攝一次。對比不同實驗組的細胞遷移運動情況。
實驗結果,對比于對照組發現Cas9-ERα的細胞遷移性明顯增高,并分別捕捉到細胞變形過程中的五種不同形態,(文章補充材料中1-5movie)。并且在Cas9-ERa+MG6001該實驗組中金屬蛋白酶抑制劑并沒有能抑制細胞缺少ERα后的高侵襲性。并分析了五種不同形態的細胞百分比。Cas9-vinculin的細胞遷移及細胞運動速率同樣明顯高于對照組,同時也觀察到可細胞變形過程中的五種不同形態,(文章補充材料中6-10movie)。綜合文章數據表明了在乳腺癌細胞中,ERα的缺失會導致黏著斑蛋白(Vinculin)的表達量下降會直接導致細胞內的肌球蛋白輕鏈p-MLC的增加,從而導致細胞的侵襲性增加。
HoloMonitor M4 非標記,活細胞成像及分析系統,實時追蹤細胞的運動過程及分析細胞運動軌跡和運動速率,實時高效地提供給科研工作者更多數據及分析結果