1、基本信息

 

 

2、B7-H3基因功能簡介

 

圖1  B7-H3介導(dǎo)的腫瘤免疫^[1]

CD276 (Cluster of Differentiation 276)是人類CD276基因編碼的I型跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，也稱為B7-H3。B7-H3的轉(zhuǎn)錄本在正常組織和實體腫瘤中廣泛存在，但其蛋白僅在腫瘤組織中高表達，正常組織中表達量極低。B7-H3主要在免疫細(xì)胞（如抗原提呈細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、單核細(xì)胞、T細(xì)胞）上表達，配體未知，可抑制NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞裂解，同時增強對細(xì)胞毒性T細(xì)胞的誘導(dǎo)，選擇性產(chǎn)生IFNγ，另一方面也能對T細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，有助于腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。很重要的是，B7-H3在多種人類實體腫瘤中高度過表達，如膀胱癌、前列腺癌和黑色素瘤等，通常與患者的不良預(yù)后和較差的臨床治療結(jié)果相關(guān)。

3、表型分析

 B-hB7-H3小鼠mRNA表達分析

 

采用RT-qPCR法對WT和B-hB7-H3小鼠的B7-H3 mRNA表達進行品系特異性分析。

B-hB7-H3純合鼠中hB7-H3的mRNA表達與野生鼠C57BL/6相似，說明B7-H3人源化小鼠模型并沒有改變B7-H3的mRNA表達水平。

B7-H3抗體與B-CAG-hB7-H3 MC38細(xì)胞結(jié)合分析

 

通過流式細(xì)胞術(shù)測試B7-H3抗體與B7-H3人源化的鼠結(jié)腸癌細(xì)胞（hB7-H3-MC38）的結(jié)合。

單個活細(xì)胞圈門后用于進一步的分析。如圖所示，與同型對照抗體(hIgG)相比，抗人B7-H3抗體(enoblituzumab，內(nèi)部合成）與hB7-H3-MC38細(xì)胞有很強的結(jié)合。

 

B7-H3抗體藥效驗證

 

抗人B7-H3抗體在B-hB7-H3小鼠中的抗腫瘤活性

(A) 抗人B7-H3抗體可抑制B-hB7-H3小鼠中的hB7-H3 MC38腫瘤生長。將鼠結(jié)腸癌hB7-H3 MC38細(xì)胞皮下植入純合B-hB7-H3小鼠（雌性，6-7周齡，n=5）中。當(dāng)腫瘤體積達到約100 mm³時，對小鼠進行分組，然后使用抗人B7-H3抗體進行治療。(B)治療期間體重變化。如圖A所示，enoblituzumab（內(nèi)部合成）在一定程度上能抑制hB7-H3 MC38腫瘤生長，也表明B-hB7-H3為抗人B7-H3抗體的體內(nèi)藥效評估提供了一個有效的臨床前動物模型。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

4、研究進展

最近的研究表明，B7-H3在腫瘤的生長、侵襲、遷移及血管生成和轉(zhuǎn)移中起著重要作用，由于其在免疫逃逸中的作用，B7-H3已成為新的免疫治療靶點。主要免疫治療手段有：單抗、雙抗、小分子、ADC藥物、CAR-T治療等，臨床上進展較快的是MacroGenics公司的enoblituzumab單抗及在此單抗基礎(chǔ)上改造獲得的B7-H3*CD3雙抗（MGD009），B7-H3-ADC藥物（MGC018）等， Daiichi Sankyo 公司的B7-H3-ADC藥物（DS-7300a）。聯(lián)合治療方面，B7-H3和PD-L1對T細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，改變T細(xì)胞的微環(huán)境以逃避抗腫瘤免疫應(yīng)答。而B7-H3和CTLA4也可能有協(xié)同作用，類似于B7-H3在PD-1通路中一樣。

 

圖2  B7-H3的潛在作用機制^[2]

 

1、基本信息

 

 

2、CCR4基因功能簡介

 

圖3  CCR4在成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤細(xì)胞中類似CD4+CD25+Treg的功能^[3]

 

CCR4 (C-C motif chemokine receptor 4)是CCR4基因編碼的一種七次跨膜蛋白，屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，也稱為CD194。主要配體有胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）、巨噬細(xì)胞的趨化因子（MDC/CCL22）、RANTES、MCP-1和MIP-1α。趨化因子是一組結(jié)構(gòu)相關(guān)的小多肽分子，調(diào)節(jié)不同類型白細(xì)胞的運輸，在免疫系統(tǒng)的發(fā)育、穩(wěn)態(tài)和功能中發(fā)揮著一定作用，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞以及參與血管生成或血管停滯的內(nèi)皮細(xì)胞也有影響。CCR4主要表達在T細(xì)胞的幾個亞群中，如Th2、Treg、Th17和Th22，在血小板表面也有表達。很多腫瘤細(xì)胞表面也高表達CCR4，如成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤、T細(xì)胞惡性腫瘤、宮頸癌、食道癌、腎癌、腦癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌及胃癌等，因此，血液癌細(xì)胞和非血液癌細(xì)胞都可以表達CCR4。與CCR4相關(guān)的疾病主要是自身免疫病如哮喘、皮炎和T細(xì)胞淋巴瘤。

 

3、表型分析

 B-hCCR4小鼠蛋白表達分析

 

通過流式細(xì)胞術(shù)對野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠中
進行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠的脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗CCR4抗體進行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠CD4+ T細(xì)胞表面檢測到mCCR4，在B-hCCR4純合鼠CD4+ T細(xì)胞表面檢測到hCCR4。

 

通過流式細(xì)胞術(shù)對野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠中CCR4蛋白表達進行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hCCR4純合鼠的脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗CCR4抗體進行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠Treg細(xì)胞表面檢測到mCCR4，在B-hCCR4純合鼠Treg細(xì)胞表面檢測到hCCR4。

 

4、研究進展

在研的CCR4的拮抗劑包括小分子化合物和抗體，其中協(xié)和麒麟的CCR4抗體藥Mogamulizumab（強ADCC作用）于2012年在日本首次被批準(zhǔn)用于治療其它惡性血液腫瘤，并于2014年被批準(zhǔn)用于治療CTCL（Lymphoma, cutaneous T cell）。CCR4抗體治療腫瘤主要有2種方式：腫瘤表達CCR4，利用抗體的ADCC效應(yīng)直接殺傷腫瘤；腫瘤表達CCR4配體，招募表達CCR4的Treg，利用抗體清除Treg解除免疫抑制。

 

圖4  CCR4抗體的作用機制^[4]

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百奧賽圖單人源化小鼠列表 

Note：

★ the in vivo efficacy was validated by using the reference antibodies (in Clinical Trail Stage).

√ the in vivo efficacy was validated by using partners antibodies (in Preclinical Stage).

〇  Human protein expression was validated by FACS.

 

參考資料

[1] Wang L, et al. B7-H3-mediated tumor immunology: Friend or foe? Int J Cancer. 2014.

[2] Li G, et al. B7-H3 in tumors: friend or foe for tumor immunity? Cancer Chemother Pharmacol. 2018. 

[3] Ishida T, Ueda R. Immunopathogenesis of lymphoma: Focus on CCR4. Immunotherapy. 2014. Cancer Sci. 102 (1), 44-50

[4] Afifi S, et al. A drug safety evaluation of mogamulizumab for the treatment of cutaneous T-Cell lymphoma. Expert Opin Drug Saf 18 (9), 769-776, US 20180094064A1