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智能定量相位成像技術QPI在實時細胞研究的應用
瀏覽次數:922 發布日期:2024-10-12 來源:本站
僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
光學顯微鏡自誕生以來,一直是人類探索微觀世界的重要工具,在眾多領域中發揮著不可或缺的作用。然而,傳統光學顯微鏡只能獲取樣品的平面性的信息,難以對透明樣品(如活體細胞)進行高清成像。因此,研究人員迫切需要一種非標記顯微技術,以便在自然狀態下實現對透明樣品的長期高清跟蹤觀察。
獨特的定量相位成像技術
定量相位成像 (Quantitative Phase Imaging, QPI)
是一種針對透明樣品的無標記成像技術,為活細胞的成像觀察帶來一種全新的高度,可以從未標記的細胞樣本中獲取豐富的信息以及更多的定量數據。
圖1.QPI的原理及優勢
QPI的原理是利用光在通過樣品時的相位變化與亮度之間的關系,測量樣品的折射(相位)特性,然后通過相關算法生成獨立的振幅與相位圖像,通過計算機軟件重建樣品圖像。因此
,
定量相位成像能夠在不添加任何外部試劑的情況下,實現對無標記樣本的安全、高分辨率成像,且定量反映被測樣品的相位信息,
這有效克服了傳統化學染色方法所帶來的光漂白、毒性及數據質量不穩定等問題。
Holomonitor成像系統
活細胞動態全息定量成像分析系統Holomonitor采用獨特的數字全息術,實現了定量相位成像。
該系統配備數字圖像傳感器、低功率二極管照明和完整的計算機算法,通過測量光線在穿過未染色細胞時方向的變化,從而量化細胞特性。由于沒有任何光會被細胞吸收而對細胞造成傷害,因此細胞完全不受影響。這使得
Holomonitor能夠對培養箱中的細胞進行無損成像、量化和長期監測,實現無標記、無細胞毒性完成視野內所有細胞的3D成像,能夠提供完整的細胞形態學參數的定量分析。
圖2.Holomonitor原理圖示
Holomonitor技術優勢
1.高分辨率和高對比度
與傳統的成像方法,如相差顯微鏡((phase contrast microscopy,PCM)相比,QPI能提供信息更豐富的細胞圖像。
PCM通過將透明樣本引起的相位移轉換為振幅變化,獲得未標記樣本的高對比度圖像。然而,這種方法僅能在二維空間中測量,要獲取空間體積信息,通常需要手動沿光學軸掃描樣本。此外,PCM的定性特性可能限制一致性分析,來自不同用戶與成像系統變量的校準問題,可能導致不一致和不可重復的實驗結果。
圖3.細胞相差圖像(左)和Holomonitor數字全息圖(右)
相較之下,Holomonitor系統獨特的QPI生成的細胞圖像可以明顯的與黑色背景區別開來,并且3D圖像也更加直觀與精準。這種精準且穩定的對比使得計算機可以準確的完成三維細胞成像,并且獲得包括厚度、面積在內的多達30多種的全息成像所獨有的細胞表型特征數據。
2.實時動態成像
HoloMonitor系統在設計之初便注重緊湊性,使其能夠輕松放入細胞培養箱中,并在高濕環境中長時間運行。在無干擾的條件下,實時監測細胞動態,既減少了對細胞的干擾,又提高了實驗的效率。與傳統的“終點法”不同,
HoloMonitor能夠實時觀察細胞的遷移、分裂等動態過程,這對于生物學研究和藥物篩選具有重要意義。
圖4.HoloMonitor內置在培養箱內實時觀測細胞
3.無標記、無損成像
傳統顯微成像只能提供細胞的2D圖像,無法從3D層面來研究細胞的形態變化。并且傳統成像技術往往需要對細胞進行標記或染色,而這些染料往往具有一定的毒性,會不同程度上影響細胞活動,帶來錯誤的研究數據和結果,同時被標記過的細胞無法被重復利用于下游研究,造成細胞浪費。
HoloMonitor采用了數字全息技術,在成像過程中無需對細胞進行染色或其他處理,從而使細胞保持了原始活性和生物學功能。
這種無標記特性使得實驗后獲得的細胞仍可繼續利用,不僅提高了實驗效率,也有效節省了寶貴的細胞資源。
因此,HoloMonitor在再生醫學和細胞治療領域具有巨大的應用潛力。
圖5.案例:無標記細胞的死亡分類
目前,PHI公司正與維克森林再生醫學研究所(WFIRM)及再生醫學開發組織(ReMDO)密切合作,利用HoloMonitor系統的優勢,構建一個用于細胞質量控制和數據存儲的綜合性系統。此項目旨在提升細胞培養過程的效率和準確性,以確保再生醫學研究和應用的高標準質量。
圖6.QPI是細胞友好型細胞質量控制的關鍵
4.強大的定量分析能力
傳統的終點法檢測,只能得到一個簡單的終點結果,無法了解細胞的動態過程,甚至失去一些重要信息,而導致不準確或錯誤的結論。
HoloMonitor采用激光全息技術,能夠精確定位單個細胞,并提供完整的單細胞遷移軌跡、速率和多達30種細胞形態學參數。
圖7. 案例:HoloMonitor跟蹤單細胞運動
此外,用戶可以利用先前實驗中捕獲的活細胞數據,通過軟件設置進行重新分析,從中提取細胞動態參數和繁殖速率等相關信息。
這種方法使得一組細胞在單次實驗中可以獲得多種應用分析結果,從而顯著提高數據的利用效率。
這些分析結果為再生醫學和細胞治療的應用提供了重要的參考依據,有助于推動相關領域的發展與創新。通過深入挖掘數據,用戶能夠更好地理解細胞行為,進一步優化治療方案,提高治療效果和患者的恢復速度。
圖8.一次實驗可獲得多種應用數據
定量相位成像推進生物醫學研究
毫無疑問,QPI是一種無標記活細胞成像不可或缺的方法,而Holomonitor代表了細胞成像技術的一次重要進步。它不僅克服了傳統相差顯微鏡的局限性,還為生物醫學研究提供了更高質量的數據和更廣泛的應用前景。通過利用這一先進的成像技術,我們能夠更深入地理解細胞生物學,為疾病機制研究和新藥開發提供強有力的支持。
如您對HoloMonitor系統有任何疑問或需求,歡迎隨時與我們聯系。典奧生物科技將竭誠為您提供優質的服務與支持。
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