核酸染料是一種能夠與DNA或RNA特異性結(jié)合并產(chǎn)生熒光信號的化學(xué)試劑，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實驗中，用于核酸的檢測、定量及可視化分析。 一、作用機制

1. ​結(jié)合方式
   核酸染料通過電荷作用​（染料帶正電，核酸帶負電）、氫鍵作用​（與堿基結(jié)合）及疏水作用​（與疏水性堿基結(jié)合）與核酸結(jié)合。
2. ​熒光信號增強
   游離狀態(tài)下染料熒光微弱，結(jié)合核酸后熒光強度顯著增強（如SYBR Gold結(jié)合后增強超1000倍），從而實現(xiàn)高靈敏度檢測。

二、主要種類與特性

1. ​溴化乙錠（EB）​
   • ​特性：嵌入DNA雙鏈堿基間，紫外激發(fā)下發(fā)出橘紅色熒光，靈敏度高（檢測限10ng DNA）。
   • ​風(fēng)險：強致癌性，需嚴(yán)格防護。
2. ​SYBR系列染料
   • ​SYBR Green I：結(jié)合雙鏈DNA，熒光信號與DNA量正相關(guān)，用于qPCR定量。
   • ​SYBR Safe：低毒性，藍光激發(fā)即可觀察，避免紫外損傷。
   • ​SYBR Gold：靈敏度是EB的100倍，適用于低濃度核酸檢測。
3. ​GelRed/GelGreen系染料
   • ​特性：替代EB，無需脫色，紫外或可見光成像均可，靈敏度與EB相當(dāng)。
4. ​Goldview系染料
   • ​特性：雙鏈DNA顯綠色，單鏈顯紅色，但熒光易淬滅，不適合膠回收。
5. ​EvaGreen
   • ​特性：低PCR抑制性，適用于qPCR、熔解曲線分析，穩(wěn)定性高（95℃加熱48小時無分解）。
6. ​LC Green PLUS
   • ​特性：用于高分辨率熔解曲線分析，特別適合高GC含量DNA。

三、評價標(biāo)準(zhǔn)

1. ​安全性
   優(yōu)先選擇低毒或無毒染料（如SYBR Safe、GelRed），通過Ames測試等評估。
2. ​靈敏度
   SYBR Gold、EvaGreen等靈敏度顯著優(yōu)于EB。
3. ​穩(wěn)定性
   EvaGreen、LC Green PLUS等在極端條件（高溫、酸堿）下穩(wěn)定性優(yōu)異。
4. ​實驗影響
   染料分子量越大（如SYBR Safe），對電泳遷移率影響越小。

四、應(yīng)用場景

• ​電泳檢測：瓊脂糖凝膠中DNA/RNA可視化（如EB、達遠辰光RedView、GelRed）。
• ​PCR分析：qPCR定量（SYBR Green I）、熔解曲線分析（EvaGreen）。
• ​細胞染色：熒光原位雜交（FISH）中核酸定位。

總結(jié)
核酸染料通過結(jié)合機制與熒光特性成為分子實驗的核心工具，隨著安全性與靈敏度的提升（如SYBR Safe、EvaGreen），其應(yīng)用正從基礎(chǔ)研究向臨床診斷（如病原體檢測）擴展。選擇時需綜合毒性、靈敏度及實驗需求。