促貼壁物質和包被方法詳解
許多細胞必須添加促貼壁物質才能貼壁生長，
促貼壁物質一般為細胞外基質，
如纖連蛋白、層粘連蛋白等。
不同細胞外基質對細胞粘附的效果一樣嗎？
細胞外基質的包被濃度是什么標準？
今天我們就來扒一扒
那些常見的促貼壁物質和包被方法~
是支持細胞和組織生長的重要胞外基質蛋白，其形成的胞外環境有利于多種細胞的粘附、生長、遷移和分化。I型膠原可促進正常細胞和轉染細胞的貼壁和增殖。膠原主要包括I型膠原，Ⅱ型膠原，Ⅲ型膠原，Ⅳ型膠原，Ⅴ型膠原，Ⅵ型膠原幾種。
I型膠原——最常見的膠原蛋白，促進細胞的貼壁和增殖，用于內皮細胞，肝細胞，肌細胞等的培養。
軟骨細胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養板上貼壁情況較差。
膠原應用及建議細胞基質濃度：
纖粘連蛋白（Fibronectin，FN）
一種位于細胞表面和血漿中的大分子蛋白質，是一種主要的細胞黏附分子，在細胞纖維基質中發揮結構和黏附性作用。
建議以1-5ug/cm2或者 0.5-50ug/ml的濃度作為細胞基質，但最佳濃度取決于細胞類型或研究目的、應用方向。
BI也提供Fibronectin solution（貨號: 03-090-1），可參考如下方法包被：
(1) 19ml 無菌的PBS加1ml的纖連蛋白 (濃度50ug/ml)；
(2) 之后一個T25 (表面積25 cm2)需用2.5ml包被, 所以視使用情形分裝包被；
(3) 一個T25加2.5ml纖連蛋白溶液；
(4) 放4度至少30分鐘；
(5) 吸出纖連蛋白溶液；
(6) 用無菌的PBS潤洗一次, 即可培養細胞。
是細胞外基質的重要組成，存在于所有上皮細胞和內皮細胞的基底側，同時也是某些細胞與細胞間交互作用的中間媒介。層粘連蛋白有細胞及組織特異性，對于調節細胞功能具有重要作用，如：協助粘附、促進生長、引導遷移、調控分化、維持表型、防止細胞凋亡等。
在哺乳動物胚胎中，Laminin-521和511是最早表達的胞外蛋白，在2-4細胞期，已經可以檢測到。LN-111支持hPSCs高效，符合GMP標準地分化為均一的多巴胺（DA）前體細胞。相比擬胚體（EB）為基礎的實驗方案，DA前體細胞的產量在LN-111上增加40倍以上。
層粘連蛋白，根據不同細胞系，包被濃度一般為5-20μg/ml。
BioLamina人類重組層粘連蛋白：化學成分限定，無異源動物成分。
使用1×DPBS(Ca2+/Mg2+)稀釋，并將包被溶液加入到培養皿中，確保包被溶液覆蓋整個培養皿表面，2-8℃孵育過夜或37℃孵育2小時。
屬于小分子蛋白，借由Vitronectin 受體讓細胞貼附于細胞基質中，主要促進細胞遷移，增加細胞貼附性、細胞分裂、細胞生長分化等，并協助細胞間的訊號傳遞。
BI重組玻璃粘連蛋白 Vitronectin ACF Human Recombinant 200 µg（05-754-0002）
使用濃度0.5mg/ml，預包被濃度：0.5µg/cm2
建議按如下濃度包被，適用于培養hPSC：
1.在冰上解凍重組玻連蛋白。
2.加入3ml /孔（6孔盤）NutriStem® V9 XF 培養基。
3.在37℃的CO2培養箱中放置至少30分鐘。
4.加入5-7.5µl玻連蛋白ACF到3ml NutriStem® V9 XF培養基中并旋轉。注意：也可以在NutriStem®V9 XF培養基中直接添加玻連蛋白ACF（濃度：0.25-0.375µg/cm2）。
MSC 促貼壁試劑
MSC促貼壁試劑是Biological industries產品，搭配MSC NutriStem XF Medium使用，效果更佳。MSC促貼壁試劑針對多種來源的hMSC（骨髓，脂肪組織和臍帶）特別開發。
特點：
• 無異源體系
可參考如下包被方法：
1.使用DPBS溶液，將MSC貼壁試劑稀釋100倍（1:100）。
2.加入適量的1XMSC貼壁試劑涂層培養皿或板；包被期間， 注意包被液不可以干掉！
3.輕輕搖動培養皿，確認貼壁試劑均勻分布在培養皿表面后，用封口膜包裹涂層的培養皿。
4.在2-8℃孵育過夜；或者在CO2培養箱，37℃,至少孵育30分鐘。
5.接種前, 吸除貼壁試劑，再用DPBS輕輕沖洗培養皿，即可接種細胞。
使用MSC Attachment solution后，MSC貼壁效果：
關注微信公眾號
可留言或私信我們
BI中國市場部：上海逍鵬生物科技有限公司
產品咨詢：021-58785545-8006, 18917190011
技術支持：400-820-3979
了解詳細信息可戳原文
詳情點擊：閱讀原文
